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第一部分目的:筛选原发性肝细胞癌组织及其正常癌旁组织差异性表达mi RNA方法:使用Affymetrix miRNA基因芯片技术检测原发性肝细胞癌组织及其正常癌旁组织差异性表达miRNA,并进行层次聚类分析,并在后期实验中采用Real-timePCR技术验证芯片结果。结果:12对人肝癌组织及其癌旁正常肝组织中存在差异miRNA 81个,其中上调基因12个,下调基因69个。其中基因芯片分析结果显示miRNA-1269a在肝癌组织中差异表达上调倍数最高基因,miRNA-125a-3p在肝癌组织中差异表达下降倍数最高基因。结论:基因芯片筛选出的差异表达miRNA可以为肝癌相关特异性标记靶向治疗新思路,还可以为非编码RNA的深入研究提供基础。第二部分目的:筛选原发性肝细胞癌组织及其正常癌旁组织差异性表达mRNA和lncRNA方法:利用晶芯~?人类lncRNA-mRNA V4.0芯片检测12对人肝癌组织及其癌旁正常肝组织的基因表达谱,并筛选出差异表达的mRNA和lncRNA,并进行层次聚类分析。并利用生物信息学方法对差异表达的mRNA进行GO富集分析和信号通路分析。并在后期实验中采用Real-timePCR技术验证芯片结果。结果:与正常癌旁组织相比较,肝癌组织差异性表达的mRNA共有2093个,其中上调基因有635个,下调基因有1458个。差异表达的lncRNA1704个,其中上调607个,下调1097个。通过GO和Pathway分析提示差异表达的mRNA可以参与细胞周期、氧化还原、信号转导、离子转运、免疫应答、细胞黏附及结合功能等生物过程。结论:基因芯片筛选出的差异表达mRNA可能参与细胞周期,信号转导等重要环节,并同时筛选出差异表达lncRNA,为构建非编码RNA调控网络建立基础,为原发性肝细胞的发生,发展机制从分子水平上提供理论依据。第三部分目的:使用生物信息学技术,构建lnc RNA-miRNA-mRNA调控网络,探索非编码RNA间可能存在的调控机制。方法:根据第一部分和第二部分基因芯片筛选出差异miRNA、mRNA和lncRNA,运用生物信息学技术,通过共表达相关分析,构建miRNA-mRNA,lncRNA-mRNA和miRNA-lncRNA共表达分析表,根据三个表达网络,寻找三者间可能存在的联系,构建lncRNA-miRNA-mRNA调控网络,并找出可能影响的信号通路。并在后期实验中采用Real-timePCR技术验证前期筛选出来的差异非编码RNA和相应信号通路上的靶基因。结果:通过对三个表达网络的相互验证,我们发现可能存在lncRNAP26302—miRNA-125b-2-3p—PLK1这一调控网络。MiR-125b-2-3p其靶基因CHEK1和CCNA2与lncRNAP26302的靶基因PLK1在同一基因通路(细胞周期G2/M过度路径)上且存在上下游关系。同时对这一通路上相关的基因进行Real-timePCR技术验证,其表达情况和RT-PCR结果具有一致性。结论:通过对原发性肝癌组织和正常癌旁组织间差异基因的筛选,mi R-125b-2-3p和lncRNAP26302通过对各自靶基因的调控作用影响了细胞周期G2/M过度路径这一基因通路,为原发性肝细胞癌的发生和发展从分子水平进行进一步的探索,为以后寻找原发性肝细胞癌的新的诊断方式,新的治疗方案提供基础。