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胆宁片是上海生物医药产业的重点产品，是上海地区第一个国家级中药新药（三类），于1991年上市。方由虎杖、大黄、郁金、青皮、陈皮、山楂、白茅根组成。具疏肝利胆、清热通下功效，用于肝郁气滞、湿热未清所致的慢性胆囊炎、胆石症。中成药面临中药现代化和二次开发的重要任务，胆宁片也需通过现代科学技术研究，阐明其药效物质基础和作用机制，并在此基础上提升质量标准，进行上市后临床再评价。本课题作为上海市科委现代中药专项“中药重点产品胆宁片二次开发研究”总课题的一部分，主要开展了基于药效物质基础的胆宁片质量标准研究。 1、胆宁片中多基原药材的药效表征 胆宁片中大黄、郁金为多基原药材，是影响胆宁片药效和安全性稳定的重要因素。其中大黄有三种基原，为蓼科植物掌叶大黄(ZH)、唐古特大黄(TH)和药用大黄(YH)的干燥根和根茎;郁金有四种基原，为姜科植物黄丝郁金(HY)、温郁金(WY)、绿丝郁金(LY)和桂郁金(GY)的干燥根块。本论文分别对不同基原的大黄药材和郁金药材的化学成分和药效差异进行表征，结果表明:(1)不同基原大黄的指纹图谱差异显著，唐古特大黄、掌叶大黄中的结合葸醌类成分明显高于药用大黄。采用ANIT致大鼠急性肝损伤模型，比较不同基原大黄及不同基原大黄制成的胆宁片的保肝利胆作用。结果显示，与其他两种大黄相比，药用大黄对ANIT所致的ANIT所致大鼠肝损伤的保护作用更加显著;不同基原大黄制成的胆宁片也显示相同的结果，即药用大黄制成的胆宁片(YHDT)对ANIT所致大鼠肝损伤的保护作用更加显著。进一步结合药用大黄制成的胆宁片6个月长毒实验未发现结肠黑变的研究结果，从而确定胆宁片中大黄的基原应优选药用大黄。(2)不同基原郁金中主要药效成分姜黄素含量差异较大，其中黄丝郁金最高，其它三种郁金含量甚微。利胆药效结果表明，用黄丝郁金制成的胆宁片对ANIT所致大鼠肝损伤的保护作用强于用桂郁金（现胆宁片产品采用的郁金来源）制成的胆宁片，因而确定胆宁片中的郁金基原应优选黄丝郁金。 2、胆宁片的质量标准研究 (1)胆宁片成品的指纹图谱研究 利用超高效液相色谱法，建立胆宁片成品的指纹图谱方法，检测了20批胆宁片样品，发现共有峰为24个，其指纹图谱方法的精密度、稳定性和重复性的RSD均小于3％，检测的20批胆宁片样品相似度均大于0.95。 (2)基于UPLC-MS/MS的胆宁片化学成分分析 利用UPLC-MS/MS技术从胆宁片中共检测、鉴定了32个化合物，其中通过与对照品比对确定20个化合物的结构。归属了这32个化合物的药材来源，发现10个化合物来源于大黄，包括大黄酸、大黄素甲醚、番泻苷(A、B、C)、2个芦荟大黄素-O-葡萄糖苷、大黄酸-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷。2个化合物来源于虎杖，包括虎杖苷和白藜芦醇。6个化合物来源于青皮，包括牡荆素、川陈皮素、甜橙黄酮、异甜橙黄酮、橘皮素和5，7，8，4-四甲氧基黄酮。2个化合物来源于山楂，包括金丝桃苷和槲皮素。9个化合物共同来源于大黄和虎杖，包括大黄素-O-葡萄糖苷、2个决明子-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚。其他的化合物来源于多个药材。 (3)胆宁片体内代谢产物鉴定分析 对胆宁片体内代谢产物进行了鉴定。检测了胆宁片中32个化合物在血清、尿液和胆汁中的分布，发现18个在尿液中，7个在胆汁中，12个在血清中，其中5个化合物在尿液、胆汁和血清中均有分布。一共在血清、尿液和胆汁中鉴定了16个成分，均为原型成分。分别为大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、橙皮苷、虎杖苷、白藜芦醇、牡荆素、番泻苷A、番泻苷B、番泻苷C、甜橙皮酮、川陈皮素、橘皮素。 (4)建立胆宁片多成分检测方法与含量标准 利用UPLC-MS建立了同时检测胆宁片中15个成分的方法，并应用于10批胆宁片的测定，并对含量做出规定:每片胆宁片中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、牡荆素、虎杖苷、橙皮苷、白藜芦醇、川陈皮素、甜橙皮酮和橘皮素的含量应分别不得少于0.034 mg、0.002 mg、3.088 mg、0.154mg、0.972 mg、0.002 mg、0.664 mg、0.055 mg、0.016 mg、0.627 mg、0.071 mg和0.424 mg，而番泻苷A、番泻苷B和番泻苷C的含量范围分别为0.009～0.021mg、0.002～0.004 mg、0.001～0.002 mg。利用胆宁片指纹图谱鉴别与多成分定量的含量测定方法相结合，形成了胆宁片新的质量标准。 上述研究结果确定了胆宁片中多基原药材大黄、郁金的最佳基原，解决了多年困扰胆宁片药效及安全性不稳定的问题;按照从药材到成品的质量控制思路，进行了胆宁片成品的质量标准研究，制定了胆宁片新质量标准，从而控制胆宁片的整体质量。