【摘 要】
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研究背景:尽管研究表明嗅神经具有再生能力,但感觉神经性嗅觉损伤后,仅有少部分患者可以恢复嗅觉功能。目前对于感觉神经性嗅觉障碍尚无满意的治疗方法。多项研究证实,i PSCs
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研究背景:尽管研究表明嗅神经具有再生能力,但感觉神经性嗅觉损伤后,仅有少部分患者可以恢复嗅觉功能。目前对于感觉神经性嗅觉障碍尚无满意的治疗方法。多项研究证实,i PSCs不仅可以由体细胞重编程而来,而且其功能与胚胎干细胞(ESCs)十分类似,具有能够向各类细胞分化的能力,无免疫排斥及伦理道德问题,本实验拟探索i PSCs能否在体外被诱导分化为嗅受体神经元及僧帽/丛细胞,从而为细胞移植治疗感觉神经性嗅觉障碍提供实验基础。目的:探讨小鼠i PSCs在体外是否具有向嗅受体神经元和僧帽/丛细胞分化的潜能。研究内容和方法:1.小鼠i PSCs的培养及多能性基因鉴定:小鼠胚胎成纤维细胞提取、传代及饲养层制备,小鼠i PSCs接种于饲养层上培养,拟胚体(EB)制备,RT-PCR鉴定i PSCs多能性基因Oct4,Nanog,Sox2的情况。2.小鼠i PSCs与嗅上皮共培养及免疫学鉴定:分离小鼠嗅上皮细胞,将小鼠i PSCs与其共培养,对分化细胞用嗅受体神经元的标志物(OMP,GAP43,NCAM)进行免疫荧光及RT-PCR鉴定。3.小鼠i PSCs与嗅球共培养及免疫学鉴定:分离小鼠嗅球细胞,将小鼠i PSCs与其共培养,对分化细胞用僧帽/丛细胞的标志物(TBX21,Iba1)进行免疫荧光及RT-PCR鉴定。结果:1.建立小鼠i PSCs稳定培养体系及EB制备,且RT-PCR显示小鼠i PSCs表达多能性基因Sox2,Nanog,Oct4。2.小鼠i PSCs与嗅上皮共培养14天后,可获得表达嗅受体神经元标志蛋白OMP、GAP43、NCAM的细胞。3.小鼠i PSCs与嗅球共培养14天后,可获得表达僧帽/丛细胞标志蛋白TBX21、Iba1的细胞。结论:我们的研究结果表明小鼠诱导性多能干细胞有向嗅受体神经元样细胞及僧帽/丛样细胞分化的潜能。
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