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肠球菌(Enterococcus)为革兰氏阳性球菌，是人和动物肠道正常菌群重要成员之一。医学临床研究已证明了肠球菌的致病性。肠球菌属共包括16个种，从临床标本分离的肠球菌以粪肠球菌和屎肠球菌多见。肠球菌之所以能引起感染在于其拥有众多的毒力因子和独特的耐药机制。在肠球菌众多毒力因子中聚集物质(asa1)、胶原蛋白黏附素(ace)、肠球菌表面蛋白(esp)都属于黏附素家族，与肠球菌的黏附和定植有关，而黏附和定植是细菌致病的前提。自2002年以来，新疆生产建设兵团部分规模化羊场发生了由肠球菌引起的羔羊脑炎，羔羊的病死率达20％左右，而对该病的防治缺乏有效手段。本研究以致羔羊脑炎肠球菌为研究对象，对asa1、ace和esp 3种表面蛋白毒力因子基因进行克隆及序列分析、构建其原核表达载体，调查3种毒力因子基因在不同来源肠球菌中的分布，并进行序列同源性分析，以期为动物肠球菌感染的免疫预防、有效诊断以及致病机制的研究奠定基础。
1.以致羔羊脑炎肠球菌基因组DNA为模板，PCR扩增毒力因子asa1、ace和esp基因的部分片段，将PCR产物克隆至pMD19-T载体上，通过PCR和双酶切鉴定后进行序列测定。测序结果与GenBank上的医学临床肠球菌的相应序列进行同源性分析。结果显示：asa1基因同源性在95.5％以上，ace基因同源性在97.8％以上，esp基因同源性在98.9％以上。
2.通过基因重组技术将致羔羊脑炎肠球菌毒力因子asa1、ace和esp结构基因的部分片段克隆入原核表达载体pET-28a(+)，将该重组质粒转化E.coli BL21，IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE电泳分析及Western blot检测。结果显示重组质粒经IPTG诱导后表达出分子量分别为26 kDa、38 kDa和41 kDa的蛋白，Western blot检测显示单一条带。结果表明：成功构建了致羔羊脑炎肠球菌毒力因子asa1、ace和esp基因的重组表达载体，表达出的重组蛋白具有反应原性。
3.对来自新疆生产建设兵团128团牛场、129团牛场、130团牛场、克拉玛依猪场及143团鸡场健康动物的肛拭和水源进行检测，利用常规细菌分离方法和肠球菌高保守的tuf基因设计的特异性引物对分离株进行PCR检测。检测364个样本，共分离肠球菌192株。其中，克拉玛依猪场肛拭分离率41.6％(32/77)，水样中未分离到；128团牛场分离率16％(8/50)，水样分离到1株；129团牛场分离率77.7％(56/72)，水样分离到2株；130团牛场肛拭分离率46％(25/54)，水样中分离到1株。143团鸡场分离率70.5％(67/95)。
4.根据GenBank公布的肠球菌的毒力因子asa1、ace和esp基因序列设计引物，分别检测来源于牛、羊、猪和鸡的肠球菌分离株(共266株)中相应的毒力因子基因分布情况，并对不同动物来源肠球菌中3种毒力因子基因克隆测序及序列同源性分析。结果显示：肠球菌3种毒力因子基因在来源于牛、羊、猪和鸡的266株肠球菌中平均检出率分别为14.7％(39/266)、15.4％(41/266)和15.8％(42/266)。健康动物来源肠球菌asa1、ace和esp基因与GenBank上的医学临床肠球菌的相应序列同源性分别在95.5％、97.1％和96.1％以上，与致羔羊脑炎肠球菌asa1、ace和esp基因同源性分别在95.7％-99.1％、98.2％-99.4％和99.2％-99.8％之间。