【摘 要】
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目的: 1.观察骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外生长特点,制备供转染用的重组腺病毒载体AdGFP和AdIFN γ。 2.观察腺病毒载体转染对MSCs生长及对目的基因表达的影响,探讨腺病毒载
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目的: 1.观察骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外生长特点,制备供转染用的重组腺病毒载体AdGFP和AdIFN γ。 2.观察腺病毒载体转染对MSCs生长及对目的基因表达的影响,探讨腺病毒载体对间充质干细胞合适的转染条件。 3.观察转IFN-γ基因的MSCs在体外对白血病K562细胞的抗白血病作用。 方法: 1.体外对冻存的MSCs细胞株复苏后用含10%新生小牛血清的低糖DMEM(L-DMEM)培养液进行培养扩增及传代,每天用胰酶消化后以细胞计数法绘制MSCs生长曲线;通过293细胞对实验用的腺病毒载体AdGFP和AdIFN γ进行大量扩增和常规制备,以TCID50法检测腺病毒滴度。 2.以不同感染复数(MOI=50、100、200、500)的重组腺病毒载体转染MSCs 4小时,采用MTT法了解腺病毒载体转染对MSCs增殖的影响;以绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪蛋白,应用荧光显微镜和流式细胞仪观察和检测Ad-GFP转染后不同时间GFP的表达;以ELISA法检测Ad-IFN γ转染MSCs后第1、8、15、22、28天细胞上清IFN γ的分泌,
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