苦瓜蛋白抑制apo(a)表达及其初步机制研究

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目的:  研究苦瓜蛋白(Momordicin,MD)对HepG2细胞载脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),apo(a)]表达的影响,并初步探索其作用机制。  方法:  1、离心、超滤、透析、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等方法提取苦瓜蛋白;  2、选取HepG2细胞系中apo(a)高表达的细胞株作为实验对象;  3、用MTT法检测不同浓度(0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg/ml)的苦瓜蛋白处理HepG2细胞24h后细胞相对存活率,并检8mg/ml的苦瓜蛋白处理HepG2细胞不同时间(0、6、12、24、48h)后细胞相对存活率,选取适宜的苦瓜蛋白实验分组时间及浓度范围;  4、用Western blot法检测苦瓜蛋白按不同浓度及不同时间分组处理HepG2细胞后apo(a)、法尼酯X受体(famesoid X receptor,FXR)、肝细胞核转录因子4α(hepatocyte nuclear factor4α,HNF4α)的蛋白表达水平;  5、用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)法检测苦瓜蛋白按不同浓度及不同时间分组处理HepG2细胞后apo(a)、FXR的HNF4αmRNA水平;  结果:  1、MTT结果显示:与对照组相比,HepG2细胞经0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.6mg/ml苦瓜蛋白处理24h后细胞存活率无统计学差异(P>0.05),而在3.2mg/ml苦瓜蛋白处理24h后,HepG2细胞存活率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);而0.8mg/ml苦瓜蛋白处理不同时间(6、12、24、48h)与对照组比较,HepG2细胞存活率的差异无统计学意义(P>0.05),按0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.6mg/ml浓度梯度分组苦瓜蛋白,并以中间浓度0.8mg/ml的苦瓜蛋白按照0h、6h、12h、24h、48h的时间梯度分组处理HepG2进行后续实验。  2、WB和RT-PCR结果显示:与对照组相比,苦瓜蛋白呈剂量和时间依赖性上调FXR蛋白、下调apo(a)蛋白及HNF4α蛋白及mRNA表达。  结论:  1、苦瓜蛋白能够抑制apo(a)表达;  2、苦瓜蛋白抑制apo(a)表达的机制可能与上调FXR及下调HNF4α表达有关。
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