NY-ESO-1特异性TCR基因转导人PBMC及转导后细胞功能研究

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目的将具有肿瘤抗原NY-ESO-1特异性的T细胞受体转导至人外周血淋巴细胞中,特异性增强转导后细胞体外识别NY-ESO-1及杀伤表达该抗原的肝癌细胞的能力,为进一步研究以NY-ESO-1为靶标的过继性免疫治疗研究奠定前期基础。方法将NY-ESO-1特异性T细胞受体基因通过体外电转的方式转导至新分离的正常人PBMCs中,RT-PCR法鉴定转导是否成功;通过流式细胞仪对转导后的PBMCs进行表型分析;用特异性NY-ESO-1b抗原肽(p157-165)刺激转导阳性的PBMCs,ELISPOT法检测转导后PBMCs细胞分泌IFN-γ的能力,并通过实时细胞监测仪检测转导后细胞对肿瘤细胞的体外杀伤作用。结果1. RT-PCR检测到电转后PBMCs能够扩增出特异性TCR片段;2.流式检测结果显示电转pCDNA3.1-ESO-TCR质粒的PBMCs细胞表面特异性TCR表达率高于未电转质粒的PBMCs的表达率(P<0.05);3.经多肽刺激后,与未电转质粒的PBMCs相比,电转质粒的PBMCs分泌IFN-γ的斑点数明显增多(P<0.05)。4.经NY-ESO-1特异性TCR转导的PBMCs体外杀伤作用明显提高。结论1.通过体外电转的方式提高PBMC表面特异性TCR表达率,进而提高PBMC体外特异性杀伤NY-ESO-1阳性肿瘤细胞的能力,为肿瘤免疫治疗提供研究基础。2.成功建立慢病毒感染人PBMC的方法,为进一步利用慢病毒转导TCR基因至人PBMC奠定基础。
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