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目的:实验室以往的研究证实,海人藻酸(KA)诱导的癫痫增强了GluR6-PSD-95-MLK3信号模块的组装,进而激活JNK下游信号通路最终导致神经元死亡。联合使用蝇蕈醇(muscimol)和氯苯氨丁酸(baclofen)激活GABAA受体和GABAB受体可以抑制KA诱导的癫痫引起神经细胞的凋亡。本文就海人藻酸诱导癫痫致神经元损伤中procaspase-3的激活及GABA受体共激活保护的分子机制作进一步研究。
方法: SD大鼠随机分为癫痫对照组(saline组)、癫痫组(KA组)和药物对照组(KA+saline组)及药物组(M+B+KA组)。脑室注射KA制作大鼠癫痫模型。取海马组织应用Biotin-Swich method检测caspase-3亚硝基化,western blotting检测procaspase-3、FasL和Fas的表达及Cyt C水平,以免疫共沉淀法检测FasL与Fas的结合,采用DTNB reduction assay对KA诱导6小时海马CA1区CA3/DG区TrxR活性进行测定。同时用焦油紫染色来观察海马CA1区CA3/DG区细胞形态。
结果:
1.联合使用蝇蕈醇和氯苯氨丁酸这两种GABA受体激动剂可以抑制KA诱导大鼠海马神经元死亡的发生。
2.联合使用蝇蕈醇和氯苯氨丁酸这两种GABA受体激动剂可以抑制KA诱导的procaspase-3去亚硝基化。
3.联合使用蝇蕈醇和氯苯氨丁酸这两种GABA受体激动剂可以抑制KA诱导的procaspase-3的裂解,减少它的活化。
4.联合使用蝇蕈醇和氯苯氨丁酸这两种GABA受体激动剂可以抑制KA诱导的FasL的表达及其与Fas的结合。
5.联合使用蝇蕈醇和氯苯氨丁酸这两种GABA受体激动剂可以抑制KA诱导线粒体中细胞色素C的释放。
6.联合使用蝇蕈醇和氯苯氨丁酸这两种GABA受体激动剂可以抑制KA诱导的TrxR的活性增加。
结论：GABA受体共激活通过抑制KA诱导FasL的表达及其与Fas的结合,线粒体中细胞色素C的释放,以及KA诱导TrxR的活性增加,从而抑制procaspase-3去亚硝基化,进而抑制了procaspase-3的裂解及活化。对神经元起保护作用。