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目的:
以湛江地区饲养的荷斯坦奶牛gDNA为模板，克隆出奶牛β-酪蛋白5’-端的不同调控区和3’-端调控区序列，然后将这些不同的调控区拼接得到6种不同的重组β-酪蛋白启动子，并对这些重组启动子的活性进行检测，筛选出活性最强的重组β-酪蛋白启动子，构建出新型的高效重组奶牛乳腺定位表达载体，为下游的乳腺生物反应器研究工作奠定基础。
结合重组β-酪蛋白启动子活性分析方法的建立，分析测定26种海洋生物中脂肪酸的含量及其各种脂肪酸的组成，尤其是其中多不饱和脂肪酸的组成和含量，对它们的脂类营养价值进行初步的探讨。
方法:
1.从荷斯坦奶牛的全血中提取gDNA，运用TA克隆技术克隆出奶牛β-酪蛋白5’-端的全长序列和6个不同调控区片段以及3’-端的调控区，一共8个片段。
2.以克隆出的5’-端6个不同调控区片段为模板，运用重叠PCR技术将其拼接出6个不同的β-酪蛋白启动子，并运用双酶切的方法进行克隆。
3.将6个β-酪蛋白启动子克隆入pGL3载体，运用双荧光素酶基因检测报告系统检测每个启动子的活性，筛选出活性最强的β-酪蛋白启动子。
4.建立脂肪酸GC-MS分析方法，分析26种湛江地区的海洋生物的脂肪酸含量和脂肪酸组成。
结论:
克隆出荷斯坦奶牛5’-端的调控序列和3’-端的调控区，与网上提供β-酪蛋白基因比较，发现它们之间序列是相当保守，5’-端的调控序列区有99％的相似度，3’-端的非翻译区只有一个碱基的差别。
成功运用重叠PCR等技术将荷斯坦奶牛β-酪蛋白启动子的不同调控片段克隆并拼接成新的去除中间负调控序列的重组β-酪蛋白启动子，构建出新型高效的重组奶牛乳腺定位表达载体奠定了基础。
在所分析的26种海洋生物中有19种的ω-3多不饱和脂肪酸的含量比ω-6多不饱和脂肪酸的含量高，有7种海洋生物中的ω-6多不饱和脂肪酸比ω-3多不饱和脂肪酸的含量高。