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自噬是一个普遍存在于真核细胞且高度保守的代谢过程，它是细胞自我更新，组织器官发育和分化的重要调节机制。大量研究表明肿瘤细胞在缺氧、营养缺乏、细胞器受损等刺激下可以发生自噬。适度的自噬可以维持肿瘤细胞物质代谢和能量供给，保护肿瘤细胞在不利环境中继续生存，而过度自噬则导致重要蛋白质和细胞器受损，细胞进而发生凋亡或者坏死。由此可见自噬对于肿瘤细胞是一把双刃剑，其最终作用可能与肿瘤细胞组织来源和受到的刺激因素有关。调控细胞自噬，发挥自噬杀伤肿瘤细胞作用可能用于肿瘤个体化治疗。本实验以EGFR突变型人肺腺癌PC-9细胞为研究对象，观察EGFR分子靶向药物吉非替尼（Gefitinib）诱导PC-9细胞凋亡和自噬的作用及相关机制。第一部分：通过MTT实验测定PC-9细胞Gefitinib IC50；Annexin V-FITC/PI双重染色和流式细胞术检测Gefitinib诱导PC-9细胞凋亡的作用。第二部分：综合采用形态学和分子生物学研究手段，观察Gefitinib诱导PC-9细胞自噬的作用。吖啶橙（AO）染色发现PC-9细胞经Gefitinib处理后，细胞内出现大量红染的嗜酸性自噬囊泡（AVOs）；细胞转染GFP-LC3质粒，激光共聚焦显微镜下可见Gefitinib处理后细胞内绿色荧光点状聚集；透射电镜下可以观察到典型自噬小体，确定Gefitinib可以诱发PC-9细胞自噬。Western blot检测自噬标记物LC3表达，结果显示Gefitinib促进LC3I→LC3II转化，升高LC3-II/I比值。第三部分：主要进行Gefitinib诱发PC-9细胞自噬的功能研究。使用自噬强效诱导剂雷帕霉素（Rapamycin）联合Gefitinib处理PC-9细胞，细胞凋亡率明显增加，p-mTOR和p-Akt表达进一步受到抑制；使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断Gefitinib诱导的细胞自噬，PC-9细胞凋亡率较Gefitinib单药处理组减少，p-mTOR和p-Akt不能被有效抑制；说明Gefitinib诱导的细胞自噬具有促进PC-9细胞凋亡作用，抑制自噬则会降低Gefitinib杀伤PC-9细胞的药效。