论文部分内容阅读
细胞自噬作用是一个进化上高度保守的功能，在自噬过程中，胞内成分被修饰并包被到双层膜结构中，形成自噬体(autophagosomes)，并与溶酶体融合完成自身蛋白的降解。细胞自噬是机体一种重要的防御和保护机制，它广泛地参与了机体免疫系统的调控。然而，关于自噬信号的调控机制仍然知之甚少。 在本研究中，我们用Bcl-3基因敲除小鼠感染刚地弓形虫（Toxoplasma gondii，T.gondii）弱毒株后，发现感染T.gondii后的Bcl-3基因敲除小鼠均在3个星期内死亡。早期宿主抗感染免疫主要由固有免疫主导，巨噬细胞与NK杀伤细胞在其中占重要比例。由此我们以小鼠巨噬细胞为研究对象，首次发现在巨噬细胞内Bcl-3参与IFN-γ诱导的细胞自噬。微管结合蛋白轻链3(Microtubule-associated protein light chain3，LC3)的转换是验证细胞自噬的重要标记，在Bcl-3基因敲除的细胞内，伽马干扰素(interferon gamma, IFN-γ)无法诱导LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化。免疫荧光实验进一步证明，Bcl-3基因敲除的细胞内，LC3聚体的斑块明显减少。Bcl-3基因敲除的巨噬细胞中，由IFN-γ诱导的lc3基因表达受到了抑制。进一步研究发现，Bcl-3参与调控了IFN-γ下游信号，磷酸化JAK2、磷酸化STAT1的激活，而IFN-γ下游基因肿瘤杀伤因子(Tumor necrosis factor, TNF-α)、白细胞介素10(interlukine10，IL-10)的表达未受影响。缺失Bcl-3的细胞内IFN-γ诱导的socs3和ip10的基因表达水平下调，而socs1和shp2正常表达，在原代巨噬细胞内Bcl-3蛋白与STAT1没有直接相互作用，提示Bcl-3调控IFN-γ下游信号有其它蛋白的参与。另外，我们在体外培养RH菌株和PTG菌株的T.gondii速殖子(tachyzoite)用于感染巨噬细胞，发现缺失了Bcl-3基因的巨噬细胞在24小时内清除了T.gondii的速殖子，说明在早期感染中，有其它的机制参与了感染调控。通过检测巨噬细胞表面Ⅱ类分子的表达，发现缺失Bcl-3基因的巨噬细胞表面的MHCⅡ本底水平略低于正常细胞，而经过IFN-γ诱导后其表达水平上调。以上结果为研究细胞自噬的功能提出了新的思路，并为进一步解答固有免疫应答中巨噬细胞抗感染的功能提供了线索。