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采用PCR方法从携带猪瘟兔化弱毒(HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000 bp左右的NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载pET-32a(+)中,构建成重组原核表达载体pETNS3。将pETNS3在大肠杆菌Rosetta (DE3)中进行优化表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NS3主要以包涵体形式表达,分子大小约95 kDa。Western Blotting分析表明重组蛋白NS3可与CSFV特异性阳性血清反应。采用Ni+亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3(90%)。以纯化的重组蛋白NS3为诊断抗原,参照《The ELISA Guidebook》采用方阵法优化ELISA最佳蛋白包被浓度和血清稀释浓度,并对ELISA其他条件进行摸索,最终建立了检测CSFV NS3抗体的间接ELISA方法。该NS3-ELISA重复性好,敏感性和特异性分别为97.3%和98%,可以用于猪群CSFV NS3抗体水平检测。将建立起的NS3-ELISA临床应用于血清学检测CSFV抗体,检测325份血清结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒比较总体符合率为87%。采用IFA对42份NS3-ELISA和IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果不一致的血清进一步检测证明,NS3-ELISA检测结果与IFA的一致性比IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒略高。用NS3-ELISA与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测来自免疫猪群不同时期的血清,研究CSFV NS3和E2抗体动态变化情况。结果表明NS3抗体产生时间迟于E2抗体,NS3-ELISA不适合于CSFV抗体早期诊断,但是根据检测NS3抗体来判断猪群是否感染CSFV的可靠性性相对要高。