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目的：
真核细胞翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor5A，eIF5A)是一种真核生物细胞内的小分子蛋白，在细胞生长、发育、衰老等多方面，尤其对是细胞增殖起着非常重要的作用，同时核糖体也能够被其刺激发挥功能，但是对eIF5A在各种途径中是如何发挥调控机制仍不甚清楚。本实验在于构建人eIF5A基因的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pGEX-4T-1-eIF5A融合蛋白后，将正确表达的融合蛋白转染至小鼠骨髓间充质干细胞来研究其对细胞增殖的影响。
方法：
以pCMV6-XL4-eIF5A作为模板，经PCR技术扩增目的片段，将获得的目的片段先连接到T载体，再经过内切酶(EcoRⅠ、XhoⅠ)剪切后，将带有酶切位点的目的片段，连接到预先用相同内切酶处理后的原核表达载体pGEX-4T-1上，经双酶切鉴定、DNA测序检测插入序列的正确性。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A转化到E.coli BL21内，在一定条件下经过一定浓度IPTG诱导后，收集足量菌体，通过超声破坏菌体的方法提取细菌目的蛋白，测浓度后经过GST琼脂糖珠pull-down纯化，再使用SDS-PAGE电泳分析以及western blot检测人eIF5A蛋白的表达。然后，在eIF5A鉴定正确后通过蛋白转染试剂Entranster TM-K转染至小鼠间充质干细胞内，并通过MTT分析检测来研究eIF5A对细胞增殖的影响。
结果：
成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A后，经DNA测序证实插入序列与设计完全一致，GST pull-down后电泳分析以及western blot结果说明大肠杆菌BL21诱导后表达出人eIF5A的glutathione S-transferase(GST)融合蛋白。MTT分析研究初步证明重组eIF5A蛋白在细胞增殖过程中发挥重要作用，能够促进细胞增殖，并且与对照组差异具有统计学意义。
结论：
本研究成功构建了融合表达GST的eIF5A的原核表达载体，获得可稳定表达eIF5A的原核菌株，并建立了能在E.coli BL21内表达带有glutathioneS-transferase(GST)标签的eIF5A融合蛋白的琼脂糖珠纯化系统，有利于进一步揭示eIF5A的功能，及其在蛋白翻译过程中的调控作用研究，为临床上探讨皮肤损伤修复的新方法奠定研究基础。
转染了eIF5A蛋白的小鼠骨髓间充质干细胞的与对照组相比增殖情况明显增高，并且差异有统计学意义，为eIF5A在细胞生长发育中的作用提供了一个有力证据，并且对研究人eIF5A蛋白的结构和生理功能如促进创伤修复提供帮助。