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粪肠球菌是重要的机会性致病菌，本试验对粪肠球菌TLME3株毒力因子sprE基因进行原核表达，并应用生物信息学软件分析sprE基因，预测其B细胞抗原表位，为下一步构建基因疫苗做准备。 根据NCBI数据库GenBank中查找的登录号为DQ985697.1的粪肠球菌丝氨酸蛋白酶基因的碱基序列，用Primer5和Olige6设计一对特异性引物，对目的基因进行克隆和原核表达，使用的克隆和原核表达载体分别为pMD18TM-T Vector和pET-28a(+)。以粪肠球菌TLME3株总DNA为扩增模板进行PCR扩增，构建质粒pMD18-T-sprE，用E.coli DH5α感受态细胞进行连接产物转化。通过蓝白斑实验筛选阳性菌株，应用PCR及单、双酶切进行鉴定，鉴定无误后送往公司测序。测序后进行原核表达，构建pET-28a-sprE重组质粒，转化到BL21感受态细胞中;对pET-28a-sprE/BL21菌株进行阳性筛选，用IPTG诱导表达丝氨酸蛋白酶蛋白，经SDS-PAGE蛋白电泳进行鉴定。应用生物信息学软件对表达的丝氨酸蛋白酶蛋白序列的理化性质进行分析预测，运用B细胞线性表位的预测方法-万氏法预测潜在抗原表位。 本试验成功克隆了粪肠球菌TLME3株毒力因子sprE基因，其碱基序列长855bp，编码285个氨基酸。pET-28a-sprE/BL21表达载体构建成功，用SDS-PAGE方法鉴定IPTG诱导的蛋白表达，丝氨酸蛋、白酶蛋白为32KD，与预期一致。成功预测了粪肠球菌TLME3株丝氨酸蛋白酶蛋白的B细胞潜在抗原表位，分别为第39～48、50～59、154～163-、189～196、250～259和270～277位的ESHSRQKRSL、DPEDRRQEVA、GKQNDRPDGP、YPGEKNHT、QTGNHGQRLN和VNEEENKR氨基酸，可以作为表位疫苗候选基因。