论文部分内容阅读
炭疽芽孢杆菌是人畜共患炭疽病的重要病原体，是公认的重要生物战剂之一，目前人用疫苗有两种：即炭疽减毒活芽孢苗和炭疽弱毒株无菌培养滤液佐剂吸附苗，自研制成功以来，已在人群中长期使用，为了深入了解炭疽疫苗的免疫应答机制，为疫苗的开发及评价提供理论基础，本研究采用炭疽芽孢杆菌两种疫苗——A16R芽孢苗与吸附PA苗，分别从三个层面上——脾、骨髓和外周血，初步观察炭疽两种疫苗的免疫应答机制。本研究共分为三部分：1、炭疽两种疫苗的制备及免疫效果测定，分两部分(1)两种炭疽疫苗的制备和鉴定；(2)A16R芽孢苗及吸附PA苗免疫Balb／C小鼠血清抗体效价动态观察及抗体亚型分析；2、A16R芽孢苗及吸附PA苗诱导Balb／C小鼠特异性ASCs的动态观察(1)首先建立了ELISPOT检测炭疽疫苗免疫Balb／C小鼠后抗原特异性抗体分泌细胞的实验方法；(2)从三个层面上，即骨髓、脾和外周血，观察了两种疫苗免疫Balb／C小鼠后特异性ASCs的动态变化及差异性，并结合外周血抗体效价的消长分析不同器官／部位ASCs应答与外周血抗体效价消长之间的相关性；3、炭疽A16R芽孢苗与吸附PA苗诱导Balb／C小鼠脾、骨髓及外周血中特异性Th2细胞应答的动态变化，并结合外周血抗体效价的消长分析不同器官／部位Th2应答的产生与维持对稳定血中抗芽孢／PA抗体的辅助作用。结论：(1)通过对炭疽两种疫苗免疫后Balb／C小鼠外周血抗体效价的动态观察，发现随着两种疫苗的加强免疫，小鼠血清中均可检测到高效价的抗体水平，并维持较长时间；吸附PA苗免疫组抗体亚型分析以IgG1和IgG2b为主，IgG2a水平较低，与对照组差异显著；A16R芽孢苗免疫组抗体亚型分析虽仍以IgG1和IgG2b为主，亦可检测到较高水平的IgG2a；(2)两种疫苗免疫后Balb／C小鼠脾、骨髓和血中均可检测到ASCs，但ASCs出现时间及强度不同，脾中最先出现，首先达峰值，骨髓中峰值晚于脾，但骨髓中应答维持时间较长，与外周血抗体效价的维持有一定的相关性；两种疫苗免疫后Balb／C小鼠脾、骨髓及外周血中ASCs的动态变化有一定差异；(3)两种疫苗免疫后Balb／C小鼠脾、骨髓和外周血中均可检测到抗原特异性Th2细胞应答，但Th2应答出现时间及强度不同，骨髓中最先出现，首先达峰值，且维持时间长，外周血中可检测到较强的Th2应答，且随着脾、骨髓及外周血的Th2应答的升高与维持，外周血抗体滴度不断升高，且于末次加强免疫后60天或30天仍维持在较高水平。疫苗免疫应答是一个复杂的多层次的过程，受复杂的网络调控，因此对于疫苗的评价应从多方面、多角度入手，全面、深入、系统的研究。