苦荞麦功能肽的提取及其降血压活性研究

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本课题以苦荞麦粉为原料,首先以蛋白质提取率为指标,利用响应面软件优化了苦荞麦蛋白质的提取条件;进而以水解度和降血压活性为指标,通过正交试验确定苦荞麦蛋白质最佳酶解工艺,随后超滤法制备降血压功能肽;最后以降血压活性为导向,对苦荞麦降血压肽运用离子交换色谱、凝胶渗透色谱进行分离纯化,并对其分子量大小、氨基酸组成进行了分析。(1)苦荞麦营养成分分析:通过物理方法和化学方法对苦荞麦中的营养成分进行了定性定量分析,确定了原材料中水分、蛋白质、粗脂肪、黄酮类化合物含量分别为3.54%,13.04%,1.36%,3.14%。(2)苦荞麦蛋白质的提取研究:首先通过单因素实验对影响苦荞麦蛋白质提取的因素(料液比、提取温度、提取时间、pH)进行研究,进一步用响应面分析软件优化了提取工艺参数。最佳提取工艺参数为:料液比为1:12,提取温度为55℃,提取时间为50 min,pH为10.0。在此条件下苦荞麦蛋白质的提取率为85.19%。(3)苦荞麦降血压肽酶解条件的研究首先以降血压活性为指标,筛选出碱性蛋白酶为制备苦荞麦降血压肽的最佳水解酶。随之以水解度为指标,运用正交试验优化碱性蛋白酶的酶解条件,最佳水解工艺为:底物浓度2%,加酶量20KU/g(以底物计算),酶解温度50℃,酶解液pH为9.0,并且在此酶解条件下,酶解2h后的酶解产物(1g/mL)具有最高的降血压活性,此时的ACE抑制率为75.85%,水解度为58.44%。(4)苦荞麦降血压肽的分离纯化首先使用截留分子量为5000Da的超滤膜进行分离纯化,得知分子量小于5000Da的肽液降血压活性最高,为40.19%。随后用离子交换色谱法对其进行了分离纯化,得到两个组分F1、F2,得知F1的降血压活性较高,为46.52%;比未纯化前提高了1.16倍。继续将组分F1进行凝胶色谱(SephadexG-25)法分离纯化,分离得两个组分,分别计为F1-1、F1-2,得知组分Fpl-1具有最高的降血压活性,为77.61%,较之上步纯化结果,降血压活性又提高了1.66倍。最后利用质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析了ACE抑制肽的分子量范围,大约在1048~2329Da之间,主要集中在1000-1500Da,由于组成人体氨基酸的平均相对分子量大小为128Da,可知该降血压肽大约由7-12个氨基酸组成;且薄层色谱显示,该成分富含天冬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸,但具体还含有哪些氨基酸,其氨基酸之间的连接方式还有待于探究。
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