穿山龙多糖调控PPARγ-NADPH氧化酶/ROS-NF-κB信号通路抗动脉粥样硬化分子机制研究

• 作 者: 周晓琳
• 机 构: 大连医科大学
• 出 处: 大连医科大学
• 发表日期: 2017年期
• 关键词: 穿山龙多糖 细胞内活性氧 动脉粥样硬化 分子机制

目的：研究穿山龙多糖调控PPARγ-NADPH氧化酶/ROS-NF-κB信号通路抗动脉粥样硬化分子机制。　　方法：（1）体外化学实验使用试剂盒产生羟自由基及超氧阴离子，小鼠肝匀浆脂质过氧化法及红细胞膜破裂法产生自由基，检测不同浓度穿山龙多糖的抗氧化作用；（2）细胞培养实验实验分为六组：正常组，H2O2模型组，穿山龙多糖高、中、低剂量组，维生素C组。给药组给予药物12 h后，除正常组外，各组均用500μmol/L H2O2作用HUVECs4 h造成损伤，实验结束后，MTT法测定细胞活力；试剂盒检测 LDH、MDA、SOD、T-AOC、GSH-Px水平以评价细胞损伤及穿山龙多糖抗氧化活性；2’,7’-二氯荧光乙酰乙酸盐（DCFH-DA）检测细胞内活性氧（ROS）的含量；Western Bolt法检测细胞内Nox4、p22phox、NF-κB（p65)、IκB及PPARγ、ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达水平；实时定量逆转录聚合酶联反应（qRT-PCR）法检测Nox4、p22phox、ICAM-1、VCAM-1、PPARγ的mRNA表达水平。　　结果：在体外化学实验中，穿山龙多糖可以抑制超氧阴离子自由基、羟基自由基和脂质过氧化的产生。在H2O2诱导的HUVECs氧化损伤模型中，穿山龙多糖可抑制细胞中LDH、MDA、ROS水平，并增强细胞内SOD、T-AOC和GSH-Px活力；此外，穿山龙多糖可在蛋白水平及mRNA水平下调 Nox4、p22phox、、ICAM-1和VCAM-1的表达，降低NF-κB（p65)、p-NF-κB（p65)的表达，抑制IκB的降解，并上调PPARγ的表达。　　结论：穿山龙多糖可以通过干扰PPARγ-NADPH氧化酶/ROS-NFκB信号通路抑制H2O2造成的HUVECs氧化损伤。本研究可为穿山龙多糖防治动脉粥样硬化（AS）提供新的药理学证据。