【摘 要】
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本研究采用本课题组分离鉴定的猪圆环病毒分离株PCV2WHN，设计一对引物，用PCR扩增出PCV2的ORF2基因，并克隆到pUCm-T载体上，测序得ORF2基因全长705bp，编码234个氨基酸。 用KpnI和
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本研究采用本课题组分离鉴定的猪圆环病毒分离株PCV2WHN，设计一对引物，用PCR扩增出PCV2的ORF2基因，并克隆到pUCm-T载体上，测序得ORF2基因全长705bp，编码234个氨基酸。
用KpnI和BamHI双酶切的方法处理pUCm-PCV-ORF2和真核表达载体pcDNA3.1(+)，进行连接反应，转化大肠杆菌JM109，酶切和PCR鉴定结果表明，成功构建了真核表达质粒pcDNA-PCV-ORF2。用碱裂解法提取并纯化真核表达质粒pcDNA-PCV-ORF2。
用真核表达质粒pcDNA-PCV-ORF2免疫小鼠(第一次免疫后两周进行第二次免疫)，用间接ELISA方法检测免疫抗体的结果表明，第一次免疫后一周产生抗体，二免后，小鼠的抗体水平迅速上升，在第4周达到高峰，其后缓慢下降，可持续11周以上。
用PCR检测了pcDNA-PCV-ORF2的机体组织器官中的动态分布。表明，首免后3h到28d小鼠的各种组织器官中均能扩增出目的基因片段。在第44d脑组织PCR结果为阴性，第58d能从血液、心脏及肌肉组织扩增出目的基因片段，基因片段在肌肉中的存留时间达到88天以上。
提取小鼠各组织样品染色体基因组DNA进行PCR检测研究表明，纯化的染色体基因组未扩增出条带，pcDNA-PCV-ORF2未整合到小鼠染色体上，证实了用真核表达质粒pcDNA-PCV-ORF2免疫的安全性。
本研究为进一步研究猪圆环病毒核酸疫苗提供了科学依据。
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