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1研究目的双黄连粉针剂组方由金银花、连翘、黄芩三味药组成,属抗病毒药物,有效成分主要是绿原酸和黄芩苷。头孢吡肟是带有β-内酰胺环类的化合物,属于第四代头孢菌素,其抗菌机制与第三代头孢菌素相似。双黄连粉针剂与头孢吡肟两药均是临床上用来抗炎、抗病毒,治疗呼吸道感染的常用药。头孢吡肟是肾脏毒性最弱的头孢菌素类抗生素,本实验研究双黄连粉针剂与头孢吡肟联用,观察是否因为双黄连诱导肾小管上有机阴离子转运体Oat-1的表达,导致头孢吡肟在肾内聚集而产生肾毒性。2研究方法2.1双黄连粉针剂及其主要成分黄芩苷和绿原酸对头孢吡肟的药动学影响运用HPLC-UV法测定静注双黄连粉针剂及其主要成分黄芩苷或绿原酸单体静注一周后,再静注头孢吡肟,测定各时间点血药浓度,计算各组的药动学参数。色谱条件:色谱柱:Phenomenex C18(Luna,250mm×4.6mm,5μm),柱温:25℃,流速:1mL·min-1梯度洗脱,UV=254nm下检测,流动相和洗脱条件见为:乙腈:体积分数为 0.05%甲酸水溶液:0-4min(0.07:0.93),5-11min(0.35-0.65),12-14min(0.07-0.93)。2.2双黄连粉针剂与注射用盐酸头孢吡肟的肾毒性研究将160只健康SD大鼠,随机分为16组,每组10只,雌雄各半,分别是:空白对照组(KB组),双黄连高(SG组)、中(SG组)、低(SD组)剂量组,头孢吡肟高(TG组)、中(TZ组)、低(TD组)剂量组,双黄连高剂量合用头孢吡肟高剂量组(SG+TG组),双黄连高剂量合用头孢吡肟中剂量组(SG+TZ组),双黄连高剂量合用头孢吡肟低剂量组(SG+TD组),双黄连中剂量合用头孢吡肟高剂量组(SZ+TG组),双黄连中剂量合用头孢吡肟中剂量组(SZ+TZ组),双黄连中剂量合用头孢吡肟低剂量组(SZ+TD组),双黄连低剂量合用头孢吡肟高剂量组(SD+TG组),双黄连低剂量合用头孢吡肟中剂量组(SD+TZ组),双黄连低剂量合用头孢吡肟低剂量组(SD+TD组)。KB组每天静注0.9%的生理盐水,双黄连粉针剂单用组静注双黄连,头孢吡肟单用组静注头孢吡肟,联用组按剂量先静注注射双黄连粉针剂,0.5h后,在静注盐酸头孢吡肟,连续给药一周。测定肾组织匀浆中MDA含量、T-SOD活力、血清肌酐和血尿酸氮含量、尿蛋白含量、尿β-D-N乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力,运用H-E染色法观察大鼠肾脏病理组织学的变化。2.3运用免疫组织化学法观察各组大鼠肾小管上皮细胞基底膜上Oat-1的表达应用免疫组织化学方法,在肾组织切片上,观察各组动物肾小管上皮细胞基地侧膜上Oat-1的表达变化。3结果建立一个简便、稳定、可靠的测定血浆中头孢吡肟含量的HPLC-UV检测方法,且血浆中内源性的物质不干扰样品峰。双黄连粉针剂及其主要成分黄芩苷和绿原酸能够增加头孢吡肟在大鼠体内曲线下面积和延长头孢吡肟的消除半衰期。双黄连高剂量对头孢吡肟的曲线下面积增加约50%,双黄连中剂量对头孢吡肟的曲线下面积增加约30%,绿原酸和黄芩苷的高剂量对头孢吡肟的曲线下面积增加约2倍。双黄连粉针剂与头孢吡肟联用,生化指标检测的结果显示,脂质过氧化产物丙二醛、血清肌酐、血尿素氮、尿中β-D-N-乙酰氨基葡萄糖甘酶、尿蛋白等,双黄连粉针剂与头孢吡肟联合应用组的这些指标比相应剂量的头孢吡肟单用组显著升高。肾组织的病理组织学观察发现,空白对照组未见肾间质充血和炎细胞浸润,肾小管管腔未见蛋白管型;给药各组大部分动物肾间质均可见不同程度的充血和肾小管或肾小球细胞凋亡;双黄连粉针剂与头孢吡肟的联用组中均出现数例的肾小管蛋白管型,且以双黄连粉针剂高剂量与头孢吡肟高剂量组的最为明显。双黄连粉针剂与头孢吡肟联合应用组相对于各单用组,有机阴离子转运体-1转运体表达明显增加,且呈剂量依赖。双黄连粉针剂与头孢吡肟联用,肾小管上皮细胞膜基底侧Oat1的表达明显增加。4结论双黄连粉针剂与头孢吡肟联合用药,可能由于Oat1对两种药物的亲和力不同,提示延长了头孢吡肟在肾内停留的时间,引起肾毒性可能。