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目的:针刺治疗阿片类药物成瘾和心理渴求采用2Hz的低频刺激的疗效优于100 Hz,但低频电针对动物觅药行为和心理渴求的作用并不清楚。本研究观察了不同强度的低频电针对条件线索及小剂量海洛因引燃诱导的大鼠海洛因觅药行为的影响,确定较佳的电针强度。并在觅药行为测试后,观察了FosB在成瘾相关脑区的表达,探讨不同强度电针作用的可能机制。
在此基础上,系统地观察了低频弱电针刺激穴位三阴交对条件性线索或小剂量海洛因引燃诱导的大鼠觅药行为的作用,同时观察NAccore、NAcshell、VTA等脑区中cfos+ChAT、pCREB+TH、fosB+ChAT及fosB+TH双标阳性表达,揭示低频弱电针治疗海洛因复吸的中枢机制。
方法:用递进固定比率程序建立大鼠海洛因自身给药模型,后进行环境消退训练,消退成功后动物随机分三组:三阴交留针组、低频弱电针和低频强电针组,分别用穴位三阴交的留针、低频弱电针、低频强电针连续处理30min,每天1次,处理5天后用条件性线索诱导海洛因觅药行为,观察不同强度的低频电针对条件性线索诱导的觅药行为的影响,继续治疗3天后用小剂量海洛因引燃诱导海洛因觅药行为,观察不同强度的低频电针对小剂量海洛因引燃诱导海洛因觅药行为的影响,用多聚甲醛灌流,取脑用免疫组化方法观察不同强度的低频电针对NAccore、NAcshell、VTA等脑区中FosB蛋白阳性表达的影响。
用大鼠静脉自身给药装置建立大鼠自身给药复吸模型,环境消退训练同时分别给单纯固定、三阴交留针和低频弱电针处理,消退训练完成后,用条件线索或小剂量海洛因引燃诱导大鼠觅药行为,观察低频弱电针对自身给药行为消退后再由条件线索或小剂量海洛因引燃诱导的觅药行为的影响。多聚甲醛灌流取脑,采用氧化酶-二氨基联苯胺-硫酸镍铵法免疫组化双标技术检测NAccore、NAcshell、VTA等脑区中cfos+ChAT、pCREB+TH、fosB+ChAT及fosB+TH双标阳性表达。
结果:
实验一、比较不同强度低频电针对线索和海洛因觅药行为的影响
1.低频弱电针在条件线索诱导时及小剂量海洛因注射引燃时均可显著减少大鼠对有效鼻触的操作数,抑制条件线索及海洛因引燃诱导的大鼠海洛因觅药行为;低频强电针则无作用,且使大鼠在海洛因引燃诱导时活动度升高。
2.在fosB免疫组化实验中,低频弱电针使NAccore、NAcshell和VTA等脑区中fosB阳性细胞数显著减少;低频强电针则作用较弱。
实验二、低频弱电针对条件线索诱导的觅药行为的影响及其作用途径与条件线索组及留针组相比,低频弱电针:
1.减少了条件线索诱导的大鼠对有效鼻触的操作数,且不影响其活动度。
2.在NAccore中,减少了fosB阳性细胞数目,而增加了fosB与ChAT共表达的细胞数目及其各占fosB及ChAT的百分比。
3.减少了NAcshell和VTA中CREB磷酸化程度:增加了NAccore中pCREB与TH共表达的细胞数目及其占多巴胺神经元的比例;减少了VTA中多巴胺能神经元活性:且增加了NAccore、NAcshell和VTA中pCREB与TH共表达的神经元占pCREB阳性表达神经元总量的百分比。
4.减少了MFB中cfos阳性细胞数目,增加MFB中ChAT阳性细胞数目。
实验三、低频弱电针对小剂量海洛因引燃诱导的觅药行为的影响及其作用途径与海洛因引燃组及留针组相比,低频弱电针:
1.减少了海洛因引燃诱导的大鼠觅药行为测试中大鼠对有效鼻触的操作数,且不影响其活动度。
2.对NAccore和VTA中CREB磷酸化程度及其对多巴胺能神经的调节产生了影响,可减少这两个脑区pCREB与TH共表达的细胞数目;pCERB阳性细胞数目在NAccore中增加在VTA中却减少;多巴胺能神经元活性(即TH阳性神经元表达数目)则在两脑区中均较少。
3.减少了NAccore中fosB与ChAT共表达的细胞数目,减少NAccore、NAcshell和VTA中fosB蛋白的表达,降低了NAccore和VTA中胆碱能神经的活性。
4.减少VTA中fosB与TH共表达的神经元数目,减少了NAc shell和VTA中fosB蛋白表达,减少了NAccore和VTA中多巴胺神经元的活性,增加了NAcshell和VTA中fosB+TH共表达的神经元占fosB阳性表达神经元总量的百分比,在NAccore则减少。
结论:
1.低频弱电针对条件性线索和小剂量海洛因引燃诱导的大鼠觅药行为均有抑制作用。
2.而低频强电针对条件性线索诱导的大鼠觅药行为没有抑制作用,低频强电针亦对小剂量海洛因引燃诱导的大鼠觅药行为有较低频弱电针弱的抑制作用。
3.小剂量海洛因引燃诱导的大鼠觅药行为测试实验中,强电针可使大鼠活动度升高。
4.低频弱电针对条件性线索诱导的大鼠觅药行为的抑制作用,可能与在海洛因长时间戒断后NAccore和VTA中多巴胺能神经元和胆碱能神经传递的长期神经元适应有关。
5.低频弱电针有抑制小剂量海洛因引燃诱导的大鼠觅药行为的作用,可能与NAccore、NAcshell和VTA中多巴胺能神经元和胆碱能神经传递的长期神经元适应有关。
6 本实验结果进一步证明了多巴胺能和胆碱能神经传递参与了条件线索和海洛因引燃诱导的觅药行为。