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目的:鸡蛋花为夹竹桃科鸡蛋花属植物鸡蛋花Plumeria rubra Linn cv.acutolia的干燥花,具有清热利湿、润肺解毒、清肠止泻、止咳化痰等功效,主治湿热下痢、里急后重、肺热咳嗽等证。鸡蛋花的质量标准尚未收载入《中国药典》,在地方标准中,多为性状鉴别,缺乏针对其主要化学成分的定性检识和含量限度标准,在实际应用中,在品种的真伪判别及质量的优劣评价中均存在明显的缺陷,因此本论文在系统的研究其化学成分的基础上,建立能够反映鸡蛋花多成分特征的色谱指纹图谱,和HPLC法多指标成分同时定量的分析方法,以期为鸡蛋花药材质量标准建立提供科学依据。方法:1.本文综合运用硅胶、Sephadex LH-20、ODS等柱层析及重结晶等方法对鸡蛋花甲醇提取物进行纯化分离,综合运用理化性质和多种波谱技术(包括IR、UV、1H-NMR、13C-NMR及二维核磁共振技术等),并结合文献数据比较以解析所分离的化合物的结构。2.应用液相色谱法(HPLC),色谱柱为(Poroshell 120,SB-C18,2.7 μm 4.6 ×100 mm)×2,流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-0.3%KH2PO4+0.2%H3PO4(C),柱温 25 ℃,检测波长254 nm对鸡蛋花药材进行指纹图谱分析研究。并对其采用《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》、SPSS19.0软件进行相似度分析、聚类分析和主成分分析,建立鸡蛋花药材标准特征指纹图谱。3.应用液相色谱法(HPLC)色谱柱为(Poroshell 120,SB-C18,2.7μm 4.6 ×100 mm)×2,流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-0.3%KH2PO4+0.2%H3PO4(C),柱温 25℃,检测波长230 nm和360 nm双波长检测28批鸡蛋花样品中的去甲基鸡蛋花苷、香豆素葡萄糖苷、原儿茶酸、鸡蛋花苷、海杧果酸B、芦丁、7’,8’(E)-la-Protodemeth ypl-umericin A、异槲皮苷、过山蕨素、肉桂酸、木犀草素-3’-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、山萘酚葡萄糖苷、15-demethylplumieride P-Z-coumarate、P1 u-mieride P-Z-coumarate、槲皮素、β-dihidroplumericinic acid、山奈酚 18 个化合物进行含量测定。4.以夹竹桃科植物中常见的强心苷类成分为对照,通过理化鉴别、薄层鉴识和U HPLC-MS等方法,检识鸡蛋花中是否含有甾体类强心苷成分。结果:1.从甲醇提取物中分离得到53个化合物,鉴定了其中的50个化合物,包括13个环烯醚萜、10个黄酮、15个有机酸、4个三萜、3个酚苷、1个香豆素和4个其它类化合物。鉴定结果如下:7‘,8‘(Z)-lα-Protodemethyplumericin A(PR-1),7‘,8‘(E)-1 α-Protodemethyplumericin A(PR-2),13-O-caffeoy-15-demethyplumieride(PR-3),Plumieride P-Z-coumarate glucoside(PR-4),Plumieride P-E-coumarate g-lucosi de(PR-5),7-β-Hydroxy-11-methyl forsythide(PR-6),落干酸(loganic a-cid)(PR-7),去甲基鸡蛋花苷(15-demethylplumieride)(PR-8),鸡蛋花苷(plumieride)(PR-9),香豆酰鸡蛋花苷(Plumieride P-Z-coumarate)(PR-10),咖啡酰鸡蛋花苷(13-0-caffeoylplumierides)(PR-11),去甲基香豆酰鸡蛋花苷(15-de-methylplumieride P-Z-c oumarate)(PR-12),β-dihidroplumericinic acid(PR-13);山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-Rham-nopyranoSide)(PR-14),芦丁(rutin)(PR-15),新异芦丁(extraneous rutin)(PR-16),异槲皮苷(isoq uercetin)(PR-17),山奈酚-3-O-3-D-葡萄糖(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside)(P R-18),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside)(PR-19),木犀草素-3’-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-3’-O-β-D-glucopyranoside)(PR-20),槲皮素(q uercetin)(PR-21),山奈酚(kaempferol)(PR-22),槲皮素-3,3‘-二甲醚(quercetin-3,3‘-dimethylether)(PR-23);3-O-香豆酰奎宁酸(3-O-coumaroyluquinic acid)(PR-24),顺式葡萄糖香豆酸((Z)-4-c-oumaric acid-4-O-β-D-glucopyranoside)(PR-25),反式葡萄糖香豆酸((E)-4-coum-aric acid-4-O-β-D-glucopyranoside)(PR-26),咖啡酸(caffeic acid)(PR-27),原儿茶酸(protocatechuate)(PR-28),海杧果酸甲酯(m ethylcerberic aci)(PR-29),海杧果酸(cerberic acid B)(PR-30),对羟基苯甲酸(P-hydroxy benzoic acid)(PR-31),肉桂酸(coumaric acid)(PR-32),间羧基苯乙酸(isophthalic acid)(PR-33),4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(4-hydroxy-3-methoxy b enzoic acid)(PR-34),海杧果酸乙酯(PR-35),邻羟基苯甲酸(salicylic acid)(PR-36),硬脂酸(stearic-acid)(PR-37),油酸(Oleic acid)(PR-38);α-香树脂醇(al pha-Amyrin)(PR-39),白桦脂酸(betulinic acid)(PR-40),β-谷甾醇(β-sitosterol)(PR-41),齐敦果酸(oleanolic acid)(PR-42);foliachinenosides A1(PR-43),6-H ydro-foliachin-enoside A2(PR-44),foliachinenosides A2(PR-45);6,7-二羟基香豆素(6,7-dihydroxy coumarin)(PR-46);葡萄糖(glucose)(PR-47),gentiobioside(PR-48),原儿茶醛(protocatechu aldehyde)(PR-49),芳樟醇(linalool)(PR-50)。2.本文建立的鸡蛋花样品标准特征指纹图谱相似度在0.9以上,符合特征图谱要求,共确认了 23个共有峰,其中有18个峰和对照品一致;红鸡蛋花、粉红鸡蛋花和鸡蛋花药材对照图谱的相似度0.8以下,该方法专属性强,可作为鸡蛋花与其伪品区分鉴别的有效手段。3.结合化学成分分离和主成分分析结果可知去甲基鸡蛋花苷、7’,8’(E)-1α-Pr otodemethyplumericin A、15-demethylplumieride P-Z-coumarate、plumieride P-Z-cou-marate、过山蕨素、异槲皮苷和海杧果酸为鸡蛋花药材的主成分,可将其做为鸡蛋花药材的质量评价的标准。所测鸡蛋花药材中去甲基鸡蛋花苷、7’,8’(E)-1α-Protode-methyplumericin A、15-demethylplumieride P-Z-coumarate、plumieride P-Z-coumarat-e、过山蕨素、异槲皮苷、海杧果酸的平均值分别为:5.38 mg·g-1、2.87 mg·g-1.40-mg·g-1、0.42 mg·g-1、1.25 mg·g-1、1.22 mg-g-1、8.52 mg.g-1。故建议蛋花药材中去甲基鸡蛋花苷、7’,8’(E)-lα-Protodemethyplumericin A、15-demethylplumieride P-Z-c-oumarate、plumieride P-Z-coumarate、过山蕨素、异槲皮苷、海杧果酸分别不得低于 4.3 mg·g-1、2.3 mg-g-1、1.1 mg.g-1、0.3 mg·g-1、1.0 mg·g-1、0.9 mg·g-1、6.8 mg·g-1。检测结果表明鸡蛋花药材中去甲基鸡蛋花苷、7’,8’(E)-lα-Protodemethyplumer icin A、15-demethylplumieride P-Z-coumarate、plumieride P-Z-coumarate、过山蕨素、异槲皮苷和海杧果酸7个主成分的平均含量明显高于红鸡蛋花和粉红鸡蛋花中。4.通过试管反应,薄层鉴别和UHPLC-MS三种方法,对夹竹桃叶与鸡蛋花和鸡蛋花叶进行检测,结果发现鸡蛋花和鸡蛋花叶未检测到甾体类强心苷类化合物。结论:1.从分离到的化合物结构类型看,环烯醚萜类、黄酮类及酚酸类为鸡蛋花的主要化学成分。新化合物5个,14个已知化合物为首次从鸡蛋花中分离得到,15个已知化合物为首次从鸡蛋花属中分离得到,丰富了鸡蛋花物质基础的研究。2.所建立的鸡蛋花药材特征图谱特征性和专属性强,方法快速、简便、可靠,可用于鸡蛋花质量控制及综合评价。3.经过系统的方法学考察,高效液相色谱法同时测定鸡蛋花药材中多个指标成分的含量简便,准确度高,重复性好,可用于鸡蛋花药材的质量分析及控制。4.鸡蛋花虽属于夹竹桃科,但并无甾体类强心苷成分。