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【研究背景】瘢痕疙瘩是皮肤组织损伤后创面过度愈合而引起的一种病理性纤维增生疾病,表现为创面皮肤过度生长,超出创面边界,侵犯邻近正常组织,无退行性改变,并且反复生长[1,2]。存在瘢痕疙瘩的患者,由于生理、心理和社会方面的后遗症,瘢痕疙瘩患者的生活质量受到严重损害[3]。成纤维细胞的异常增殖是导致病理性瘢痕增生的主要原因[4]。虽然对于瘢痕疙瘩的研究取得了很大的进展,但瘢痕疙瘩形成的病因和基本机制仍未完全阐明。因此,有必要为有效治疗瘢痕疙瘩寻找新的证据[5[7]。目前研究表明,许多lnc RNA参与了纤维化的进程[8],如HNF1A-AS1[9]、COL1A2-AS1[10]、CACNA1G-AS1、HOXA11-AS、LINC00312、RP11-91I11.1[11]等。最近的研究表明,钙电压门控通道亚基Alpha1 G反义RNA 1（CACNA1G-AS1）在瘢痕疙瘩中表达上调,对瘢痕疙瘩纤维化的细胞迁移有着积极作用[12]。然而,lnc RNA CACNA1G-AS1在人瘢痕成纤维细胞中的表达和功能至今仍不清楚。Micro RNAs是单链非编码小RNA,其长度通常为20～24nt。在细胞的发生发展过程中发挥了重要作用[13,14]。许多研究关注mi RNA在许多生物学过程中作为重要的表观遗传调控因子的作用,包括致癌和成纤维细胞激活[15,16]。在此之前,有报道称一些mi RNAs参与了瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长、增殖、分化和凋亡。例如,mi R-188-5p和mi R-203可降低瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和侵袭[17,18]。已经证明,Mi R-196a的敲除增强了瘢痕疙瘩成纤维细胞中I型和III型胶原的表达[19]。Wang等人研究发现,mi R-21在瘢痕组织中表达上调,影响人瘢痕成纤维细胞的增殖和凋亡[20]。Pang等人的研究表明,mi R-152-5p被证实具有抗纤维化作用,可以抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的进展[21]。然而,目前尚无关于瘢痕疙瘩成纤维细胞中CACNA1G-AS1与mi R-205相互作用的相关研究。在本研究中,我们探讨了CACNA1G-AS1与mi R-205的关系,研究它们在增殖、侵袭和凋亡方面对瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响。【目的】1、制备瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常成纤维细胞,比较瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常皮肤来源的成纤维细胞的生物学差异,并且为后续实验提供基础和依据。2、对CACNA1G-AS1在瘢痕疙瘩中的表达水平、生物学功能进行进一步的探究,研究其对成纤维细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,明确CACNA1G-AS1在成纤维细胞中的功能作用,为进一步的实验提供依据。3、对mi R-205在瘢痕疙瘩中的表达水平和生物学功能进行探究,研究其对成纤维细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,明确mi R-205在成纤维细胞中的功能作用;4、探究CACNA1G-AS1与mi R-205之间的靶向作用,以及CACNA1G-AS1通过调控mi R-205表达从而影响瘢痕疙瘩形成的作用机制,以期为瘢痕疙瘩的生物学治疗提供新的靶点。【方法】采用实时定量聚合酶链反应（q RT-PCR）检测CACNA1G-AS1和mi R-205水平。转染细胞增殖情况通过细胞计数Kit-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）法检测,转染细胞侵袭情况通过Transwell实验检测,转染细胞凋亡率通过流式细胞术检测,Western blot检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中caspase-3的表达。双荧光素酶报告基因法检CACNA1G-AS1与mi R-205的关系,采用RNA免疫沉淀法进一步证实两者之间的关系。【结果】与正常皮肤组织和正常瘢痕疙瘩成纤维细胞相比,瘢痕组织和瘢痕疙瘩成纤维细胞中的CACNA1G-AS1表达水平显著升高。CACNA1G-AS1过度表达能够促进瘢痕疙瘩中成纤维细胞的增殖和侵袭,抑制细胞凋亡。CACNA1G-AS1靶向调控mi R-205,在瘢痕组织和瘢痕疙瘩成纤维细胞中mi R-205表达明显下降。CACNA1G-AS1过表达和mi R-205敲低均可负向调控mi R-205的表达,促进细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡。此外,CACNA1G-AS1和mi R-205对成纤维细胞的增殖、侵袭和凋亡起拮抗作用。【结论】1、CACNA1G-AS1在瘢痕组织和瘢痕疙瘩成纤维细胞中高表达,参与了人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和发育。2、CACNA1G-AS1能够提高瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、侵袭能力,降低瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡水平。3、mi R-205与CACNA1G-AS1直接作用,并受到CACNA1G-AS1的负向调控。4、mi R-205能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和侵袭能力,促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡。5、CACNA1G-AS1通过靶向作用于mi R-205,抑制mi R-205的表达来调控成纤维细胞的增殖、侵袭和凋亡。