不同证候食管癌差异表达基因研究

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目的:利用基因芯片技术探讨食管癌不同阶段(癌组织、癌旁组织、正常组织)相关基因的表达,筛选不同证候食管癌组织的差异表达基因,初步揭示食管癌不同证候之间在基因表达上的相互关系,对其可能的分子机制进行分析。方法:①建立食管癌组织标本库及食管癌临床资料数据库,筛选严格配对的21例食管癌癌组织、癌旁组织及正常黏膜组织。对21例食管癌癌组织、癌旁组织、正常黏膜组织以及不同证候的痰气交阻证(P)、瘀血内结证(B)、津亏热结证(F)和气虚阳微证(Q)的表达谱依次进行比较;②提取21例食管癌癌组织、癌旁组织及正常黏膜组织的总RNA,琼脂糖凝胶电泳质检,总RNA的纯化,逆转录成cDNA,并用单标法Cy3-dUTP标记于食管癌癌组织、癌旁组织及正常组织后制成探针,与基因表达谱芯片进行杂交,然后扫描芯片荧光信号图像,采用SAS软件对芯片图像进行分析,最后得到筛选的结果。结果:①通过SAS软件分析,癌组织与癌旁组织差异基因2505个,癌组织与正常组织差异基因2659个。P组与B组的癌组织共有差异基因18个;癌旁组织共有差异基因10个;正常组织共有差异基因6个;P组与F组的癌组织共有差异基因52个;癌旁组织共有差异基因8个;正常组织共有差异基因2个;P组与Q组的癌组织共有差异基因52个;癌旁组织共有差异基因24个;正常组织共有差异基因46个;Q组与B组的癌组织共有差异基因12个;癌旁组织共有差异基因5个;正常组织共有差异基因84个;Q组与F组的癌组织共有差异基因26个;癌旁组织共有差异基因6个;正常组织共有差异基因8个;B组与F组的癌组织共有差异基因22个,癌旁组织共有差异基因8个,正常组织共有差异基因15个。②对食管癌不同阶段筛选出的差异基因进行GO分类,主要分为三大类(细胞组成、分子功能和生物学过程)其中将这些差异基因按分子功能分主要涉及催化活性、信号转导、分子转运、结合、酶活性调节、转录活性调节、蛋白运输功能、细胞生长、凋亡等功能过程。③对食管癌不同阶段筛选出的差异基因进行信号通路(pathway)分析,筛选出的主要信号通路为:Neuroregulin receptor degredation protein-1Controls ErbB3receptor recycling,cdc25and chk1Regulatory Pathway in response to DNAdamage,Inhibition of Matrix Metalloproteinases,Small Leucine-richProteoglycan(SLRP)molecule,Mechanism of Acetaminophen Activity andToxicity等主要的信号通路。对食管癌不同证候筛选出的差异基因进行信号通路(pathway)分析:P组和B组存在的差异基因进行信号通路分析主要以TSP-1Induced Apoptosis in Microvascular Endothelial Cell,Drugmetabolism-cytochromeP450-Homosapiens和Drugmetabolism-otherenzymes-Homo sapiens(human)通路为主;P组和F组存在的差异基因进行信号通路分析发现主要与Dendritic cells in regulating TH1andTH2Development,Sonic Hedgehog(SHH)Receptor Ptc1Regul at es cellcycle和ADP-RibosylationFactor,通路有关;对P组和Q组存在的差异基因进行信号通路分析主要以Sonic Hedgehog(SHH)Receptor Ptc1Regulates cell cycle,Leukocyte transendothelial migration-Homo sapiens(human)、Antigen Dependent B Cell Activation、Alternative ComplementPathway,Small Leucine-rich Proteoglycan(SLRP)molecules通路为主;对Q组和B组存在的差异基因进行信号通路分析主要以RabGTPasesMark Targets In The Endocytotic Machinery,Drugmetabolism-cytochromeP450-Homosapiens(human),Transcriptional activation of dbpb frommRNA、Classical Complement Pathway,Complement Pathway通路为主;对Q组和F组存在的差异基因进行信号通路分析主要以Limoneneandpinene degradation-Homo sapiens(human),Th1/Th2Differentiation,TheCo-Stimulatory Signal During T-cell Activation、Phospholipase C-epsilonpathway通路为主;对B组和F组存在的差异基因进行信号通路分析主要以Bone Remodelling,IL17Signaling Pathway,Drugmetabolism-cytochrome P450-Homo sapiens(human)、Endocytosis-Homo sapiens(human)通路为主。结论:①食管癌不同阶段之间有其各自基因表达谱。其中神经调节蛋白受体降解蛋白1调控ErbB3受体再循环信号传导通路、基质金属蛋白酶抑制信号通路、细胞周期信号传导通路为食管癌三大主要信号传导通路;②食管癌中医不同证候之间有其各自基因表达谱,痰气交阻证候中差异基因功能主要是DNA甲基化、细胞增殖、DNA复制和酶活性调节;津亏热结证候中差异基因功能主要是DNA代谢过程、有丝分裂期、磷代谢过程;瘀血内结证候中差异基因功能主要是有丝分裂细胞周期、核分裂、细胞(核)分裂、细胞增殖;气虚阳微证候中差异基因功能主要是诱导细胞增殖和迁移、磷酸化作用和蛋白质转运。③对食管癌中医不同证候差异基因的信号通路分析,细胞周期信号传导通路均涉及到食管癌四个不同证候中,食管癌虚、瘀、痰、滞病机与不同的信号传导通路相关,其中痰气交阻证候中差异基因主要是参与MAPK信号通路;津亏热结证候中差异基因主要是参与Ca2+信号传导和基因转录;瘀血内结证候中差异基因主要是参与P53信号传导和DNA复制信号通路;气虚阳微证候中差异基因主要参与ErbB信号通路和细胞吞噬通路。初步揭示了食管癌不同证候的分子信号传导机制。
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