多溴联苯醚的酶联免疫吸附分析的研究

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多溴联苯醚是一种被广泛使用于电子、纺织、建材等工业领域的溴代阻燃剂,现已被列为新型持久性有机污染物质之一。该物质性质稳定难降解且具有很强的亲脂疏水性,因此可以在生物体内富集并产生积累放大效应,并伴随蒸发-冷凝等环境行为远距离、多介质传输,因此广泛存在于空气、水体、土壤、生物体内。多溴联苯醚具有多方面的毒性危害,即使是微量存在也会对人体健康及生态环境造成不良影响。  酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)作为一种高效的免疫生物分析技术,具有灵敏、快速、特异性强等优点,尤其是要求对大量环境样品的进行初期筛选时很有优势,可大幅度提高监测工作效率,同时降低监测成本,为仪器检测提供有效依据。本文旨在建立一种针对于多溴联苯醚的ELISA分析方法,为其快速有效检测提供理论依据。  首先,本文根据多溴联苯醚(poly brominated diphenyl ethers,PBDEs)中BDE-47为代表研究物质,通过改造其分子结构,设计合成半抗原C15H9Br3O3和C11H13Br2O3N,利用1H核磁共振波谱(1HNMR)和高分辨电子轰击质谱(HREI-MS)进行了结构鉴定,并分别与载体蛋白偶联后得到免疫原和包被原。使用免疫原对四只新西兰大白兔进行7次免疫后取得特异性抗血清。建立ELISA检测方法,实验测定半抗原C15H9Br3O3-锁孔血蓝蛋白(K1-KLH)抗体效价为1∶32000,对目标化合物BDE-47的IC50为0.776mg/L,检出限为0.081mg/L;实验测定半抗原C15H9Br3O3-牛血清白蛋白(K1-BSA)抗体效价为1∶400000,对目标化合物BDE-47的IC50为0.130mg/L,检出限为0.01mg/L。  其次,为评价所建立的间接竞争抑制ELISA,本文建立传统气相色谱-质谱联用仪器分析方法及商品化ELISA试剂盒检测作为验证方法,并分别建立针对BDE-47的仪器检测和ELISA检测的环境样品前处理方法。分别使用间接竞争抑制ELISA,气相色谱-质谱(GC-MS)仪器分析方法及ELISA试剂盒对采集的大沽排污河水样、底泥及海河常见鱼样处理后进行检测后对比分析检验结果,三种检测法均可满足富集后的环境样品的检测要求。  最后,以渤海湾近岸海域为研究区域,采集水样、底泥(上层、中层、底层)、鱼样后,采用所建立的ELISA试剂盒分析方法及气相色谱-质谱联用仪器分析方法进行检测,分析PBDEs污染特征。分析结果表明,水体溶解相及鱼体内主要以BDE-28,BDE-47,BDE-99的低溴代化合物为主要污染物,而在水体颗粒相和底泥中BDE-209也是优势污染物。
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