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本论文利用高效液相色谱(HPLC)的高分离特性和电感耦合等离子质谱(ICP—MS)的高灵敏度、低检出限优势研究了中药水飞蓟中微量元素和水飞蓟素的溶出率,在此基础上进一步研究了Cu、Mn、Fe、Zn等9种微量元素的形态。实验发现大部分微量元素在沸水中的溶出率较大,没有与水飞蓟素黄酮结合,而主要以无机离子或其它强极性的形式存在。同时我们还发现通过多次冲泡水飞蓟果实,可以有效提取其中的水飞蓟素。结合实验结果和中医药理论,提出了一种简单有效的水飞蓟素和微量元素的摄入方法。
1.水飞蓟中无机元素的溶出性质及含量分布
用电感耦合等离子体光谱(ICP—AES)和ICP—MS法测定了水飞蓟果实、脱脂水飞蓟果实粉及标准提取物(水飞蓟素)中多种无机元素的含量,结果表明绝大多数元素的含量从脱脂果实粉一果实一提取物逐渐降低。在此基础上,测定了水飞蓟果实沸水提取溶液中元素的含量,得出水飞蓟果实中元素的初级形态含量,同时还研究了元素的溶出率与浸泡次数的关系,发现大部分元素以可溶态存在,浸泡前四次其总的溶出率远远高于后三次。
2.水飞蓟中水飞蓟素的溶出性质及含量分布
采用反相高效液相色谱法(RP—HPLC),甲醇—水-1%乙酸三元梯度洗脱条件,实现了水飞蓟素中七种主要黄酮成分的基线分离,通过液相色谱—电喷雾质谱联用方法对各组分进行了定性鉴定,用外标法对水飞蓟果实、脱脂水飞蓟果实粉和两种水飞蓟素提取物中水飞蓟宾以及水飞蓟素含量进行了定量测定,测定的相对标准偏差分别为0.12-0.76%和0.14-0.60%,水飞蓟宾的回收率为98.2-101.9%。并从甲醇、乙腈与水飞蓟宾、异水飞蓟宾分子之间相互作用的角度,解释了甲醇作为流动相有机调节剂在水飞蓟宾A和水飞蓟宾B,异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B分离方面的独特优势及其原因。在七种水飞蓟素黄酮获得完全分离的基础上,研究了沸水冲泡条件下,水飞蓟果实中主要水飞蓟素成分的溶出率。极性较大的水飞蓟汀和紫杉叶素在沸水中的溶出率较大,七次冲泡的总溶出率大于85%,其它黄酮的总溶出率也都大于30%,本实验结果为直接饮用水飞蓟果实茶提供了重要依据,同时也为研究水飞蓟果实中无机元素的次级形态奠定了基础。
3.水飞蓟水提液中元素次级形态的研究
利用前面建立的HPLC方法对水飞蓟果实沸水提取溶液进行制备分离,按不同的时间段收集色谱柱后流出液,在对收集液作简单的处理后,用ICP—MS测定了不同时间段收集液中As、Cd、Cr、Cu、Fe等9种元素的含量,并同时测定了不经过色谱分离的沸水提取溶液中对应元素的含量作为比对,根据各个时间段的黄酮成分和无机元素含量的对应关系,初步探讨了水飞蓟沸水提取液中元素的次级形态。本实验结果进一步说明饮用水飞蓟果实茶是一种简单有效的摄入水飞蓟素和微量元素的方法。