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松墨天牛(Monochamus alternatus)又名松褐天牛、松天牛，属于鞘翅目(Coleoptera)、松墨天牛是危害松树的主要蛀干害虫，更是传播毁灭性病害松材线虫(Bursaphelench xylophilus)病的媒介昆虫，被列为国际国内检疫性害虫。 昆虫表皮的性质，主要由表皮蛋白基因(insect cuticular protein genes，ICPG)所决定，昆虫表皮蛋白(insect cuticular proteins，ICP)是结构蛋白，它和几丁质一起组成昆虫抵御外界环境的屏障--角质层。昆虫的表皮对昆虫适应复杂多变的生存环境至关重要，还是覆盖机体的细胞外结构，为昆虫提供有效的保护，以抵御环境中有害因素的影响，在昆虫的整个发育阶段，提供可变的机械性能，营造昆虫发育的最优环境。 本研究利用3’RACE末端全长扩增方法扩增3’端序列，抽提松墨天牛总RNA，先由Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)将Poly(A)+RNA反转录成cDNA，然后再使用TaKaRa LA Taq，以反转录的cDNA为模板，进行套式PCR反应，扩增出松墨天牛表皮蛋白cDNA的3’末端的序列，经DNASTAR软件分析拼接获得到松墨天牛幼虫表皮蛋白(MoalICP)全序列。利用NCBI在线工具ORF finder搜索其开放阅读框。其开放阅读框(ORF)长为408bp，编码135个氨基酸，表皮蛋白的分子量为14507.417 Da。含有广义Rebers&Riddiford Consensus(R&R保守基序)，属于IPG中CPR基因家族成员。分别利用ProtScale程序、TMpred和COILS Server在线分析松墨天牛表皮蛋白的理化性质和疏水性，对松墨天牛表皮蛋白进行在线跨膜区分析和卷曲螺旋预测分析，可知谷氨酸和缬氨酸含量最多，各有13个，占9.63％；丝氨酸和丙氨酸含量次之，各有11个，占8.15％；整个序列不含精氨酸。其中酸性氨基酸残基(Asp+Clu)20个，碱性氨基酸残基(Arg+Lys)7个。MoalICP大约在10氨基酸位有一个含有一个典型的疏水性区域，属于亲水性氨基酸，在10氨基酸位到26氨基酸位左右含有一个跨膜片段，方向为膜内向膜外，与该蛋白质的疏水性区域分析结果基本一致。COILS预测到的MoalICP含有两个卷曲螺旋。通过National Center forBiotechnology Information网络平台及GENEDOC软件比较与其他昆虫的相似性，发现与家蚕幼虫表皮蛋白的一致性最高，高达86％，与家蚊，佛罗里达弓背蚁等昆虫的相似性也达76％以上。采用SABLE在线分析软件，并用在线视图工具POLYVIEW将预测结果转化为图形形式输出，结果表明该蛋白二级结构为混合型，N-末端和后端区域都包含了螺旋、折叠和无规则卷曲等多形式。将天牛幼虫(3～4龄)解剖分离，选取其头部，体壁，利用SYBR GreenⅠ染料法进行Real-time PCR，成功检测表皮蛋白基因在头部和体壁的表达量差异，以头部为对照，体壁中表皮蛋白基因的表达量约为其2/5倍。 本论文从松墨天牛幼虫中克隆出表皮蛋白基因，扩增出基因全序列，运用生物信息学方法对该基因进行序列分析，并进行了该基因不同部位的表达差异分析，为进一步研究松墨天牛表皮蛋白的生理功能奠定基础。