【摘 要】
：
脂肪酶作为生物催化剂广泛应用于食品、医药和生物柴油等领域。米黑根毛霉脂肪酶(RML)是一条α/β型单链多肽，具有较好的立体选择性、较高的水解和转酯活力。由于天然米黑根毛
论文部分内容阅读
脂肪酶作为生物催化剂广泛应用于食品、医药和生物柴油等领域。米黑根毛霉脂肪酶(RML)是一条α/β型单链多肽，具有较好的立体选择性、较高的水解和转酯活力。由于天然米黑根毛霉脂肪酶产量低，无法满足大规模工业生产的需求。本研究利用基因工程技术将米黑根毛霉脂肪酶基因整合到毕赤酵母实现异源高效表达，提高了米黑根毛霉脂肪酶产量，对该酶的工业化应用具有重要意义。本文以实验室保存的RML全长基因为出发材料，根据毕赤酵母的密码子偏好性，优化了RML基因密码子，并以此构建了以FLD1为启动子的诱导表达毕赤酵母基因工程菌。运用摇瓶发酵筛选，并初步研究了异源表达的米黑根毛霉脂肪酶的酶学性质。主要的研究内容及结果摘要如下。1.优化了RML基因。以实验室保存的米黑根毛霉脂肪酶基因为出发材料，根据毕赤酵母的密码子偏好性，利用重叠延伸PCR定点突变优化了RML基因中7个低频密码子，并以优化前后含前肽的RML基因分别构建毕赤酵母诱导型分泌表达载体pFLD-RMLori和pFLD-RMLopt。2.构建了RML高效基因工程菌。将pFLD-RMLori和pFLD-RMLopt载体分别电转化入GS115中，通过三丁酸甘油酯酶活力检测平板初筛和摇瓶发酵复筛，分别获得酶活力最高的两株菌GS115/pFLD-RMLori32#和GS115/pFLD-RMLopt42#，其酶活力分别达到120U/ml和195U/mL。经密码子优化后，RML酶活力提高了60%。3.初步研究了异源表达的RML酶学性质。以GS115/pFLD-RMLopt42#克隆子摇瓶发酵上清液为对象，利用对硝基苯酚酯(pNP)对重组RML进行了初步的酶学性质研究。结果表明，RML的最适反应温度和pH分别为45°C和pH8.0。40-60°C温育2h后，酶活力只残留约15%，K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Ni2+、Cu2+等对RML酶活有轻微抑制作用，Fe3+、Zn2+、Fe2+则对其有较强抑制作用，而Sr2+对RML有一定激活作用；其最适水解底物为对硝基苯酚丁酸酯(C4)。
其他文献
富含黄酮类化合物的苦荞,作为药食兼用作物,具有潜在的研究利用价值。研究发现黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒、免疫调节等保健和药用功能。苦荞中二
tRNA是显著影响翻译的效率和准确性的重要因素之一。细胞中tRNA的配置及其对延伸率的影响是翻译研究的一个重要课题。在本研究中,我们利用酿酒酵母的ribosome profiling数据,
在准备进入冬眠期以前,冬眠动物就会摄入大量的食物、并且在体内储存大量的脂肪；进入冬眠期后,动物整体代谢降低,它们的能量来源由主要依靠糖代谢转变为主要依靠脂代谢,利用脂
由于废旧轮胎重复利用率不高,因此通过焚烧、掩埋等处理,不仅造成资源浪费,更会加重环境污染。另外伴随着基础建设的高速发展,大量开采河砂已经给自然环境造成了无法挽回的损失。而将橡胶颗粒部分替换混凝土中的骨料,不仅可以解决部分环境污染问题和减少过度依赖自然资源,还可以改善混凝土力学性能。为保证试验研究的可行性,试验采用粒径为20-40目的废旧橡胶颗粒,以(0%、20%、40%和60%)等体积替换混凝土中
自从数字地球的概念提出以来,随着互联网技术的发展与人们需求的改变,地理信息技术的应用已经逐渐从提供软件的服务方式向在线提供地理信息服务转变。国内外众多的互联网公司
高等植物的胚后发育包括种子萌发、幼苗生长、幼龄和成熟营养阶段和开花结果生殖阶段。幼龄和成熟期构成营养生长时期,幼龄期(即果树的童期)植物不能诱导开花,进入成熟期后植
近年来由于N20、CH4和CO2等三种温室气体的年排放量逐渐增加,导致全球气候变暖等环境问题己经得到全球广泛关注,成为当今的研究热点。农田生态系统作为温室气体重要的排放源,
示意性网络地图(Schematic Network Maps)使用高度抽象的图形符号来表示地物,着重展示地物间拓扑结构,以易于理解的方式表达地理网络,常被用于交通、管道等网络状地物体系的
计算机软硬件的飞速发展促进了对虚拟植物的深入研究,随之植物冠层光合.有效辐射(Photosynthetic Active Radiation,PAR)分布的研究也越来越受到重视。植物冠层内的光合有效
雾是公路交通中最严重的气象灾害之一,国内外关于沿海高速公路雾的发生特征及成雾机理的研究鲜见报道。本文利用布设在江苏沿海高速公路的交通气象监测站在2012年6月-2014年5