【摘 要】
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目的:本实验从骨髓中分离间充质干细胞（MSCs）体外扩增培养,观察MSCs的形态,检测不同因素对MSCs生长的影响,测定生长曲线。并体外诱导MSCs向成骨细胞方向分化,检测成骨特有的骨
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目的:本实验从骨髓中分离间充质干细胞（MSCs）体外扩增培养,观察MSCs的形态,检测不同因素对MSCs生长的影响,测定生长曲线。并体外诱导MSCs向成骨细胞方向分化,检测成骨特有的骨钙素及Ⅰ型胶原的表达,从而了解MSCs的生物学形状,探索MSCs的生长条件。 方法:抽取兔髂骨骨髓,利用Percoll分离液（1.073g/ml）进行密度梯度离心法从骨髓中分离骨髓间充质干细胞,体外培养扩增,观察其形态学变化,测定MSC的生长动力学及对MSC生长的影响因素的分析,了解MSCs的生物学性状,研究MSCs的体外生长规律。 同时体外分离诱导培养MSCs向成骨细胞分化(培养液中加入地塞米松终浓度为10-8mol/L-、β—甘油磷酸钠为10mmol/L、维生素C为50μg/mL),通过检测碱性磷酸酶表达,Ⅰ型胶原分泌,骨钙素生成对其体外诱导成骨能力进行定性检测和观察,研究细胞生物学特性及其体外成骨能力。 结果:1、分离获取了较高纯度的MSCs,保持了细胞的活性。Percoll分离液（1.073g/ml）分离的骨髓单个核细胞24小时后贴壁,细胞呈圆形,48—72小时后呈纺锤形,梭形,增值迅速,原代培养月10—14天左右可以达到80—90%融合,传代细胞24小时完全贴壁,5—7天达到80—90%融合,可传代至10代以上,经传代后细胞增值能力有所下降,MSCs细胞逐渐出现衰老现象。细胞老化的表现为:细胞生长速度缓慢。细胞胞浆中出现多量空泡及颗粒样物质,细胞碎片的增多。在该培养条件下,原代
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