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目的:探究痉挛截瘫蛋白6(SPG6)在急性髓系白血病(AML)发展中的作用机制。方法:首先针对三个独立的AML病人数据库(分别是GSE10358、TCGA、GSE6891等三个数据库)分析SPG6表达水平与AML患者生存率之间的关系;并且,采用RT-PCR方法检测了人SPG6基因在不同类型白血病细胞中的表达情况。针对SPG6 mRNA序列设计了两对干扰序列,并构建了其慢病毒载体。利用HEK-293T细胞包装SPG6 shRNA慢病毒,并感染NB4、MV4-11等AML细胞,进行SPG6基因的沉默。SPG6沉默后,采用细胞计数仪直接计数法检测细胞生长情况;并运用流式细胞仪检测其凋亡变化;用Western blot的方法检测BMPR2、Caspase3、Smad相关蛋白、BCL2等蛋白的表达或活化;采用RT-PCR方法检测Bcl-2以及Bcl-xl的转录情况,从而探索研究人SPG6的沉默导致AML细胞生长减缓和凋亡增加的分子机制。结果:1.对三个独立的数据库数据分析本发现SPG6的表达水平与AML患者的生存时间呈显著的负相关;并且发现SPG6在各型AML中的表达均高于人正常细胞。2.成功构建了 2条针对SPG6的PLL3.7 shRNA慢病毒载体质粒(经过测序均成功验证)。使用慢病毒三质粒包装系统在293T细胞中成功包装出滴度较高的慢病毒。3.用慢病毒感染NB4和MV4-11细胞系后,感染效率均能达到30%-50%。RT-PCR 结果显示 SPG6 shRNA-1 和 SPG6 shRNA-2 敲降效果在 50%-80%之间。4.SPG6基因沉默后,能够促进NB4、MV4-11两种AML细胞的凋亡并抑制其生长增殖。5.经Western blot检测发现,干扰人SPG6基因后能够影响BMPR2、Caspase3、Smad相关蛋白的表达;RT-PCR检测发现干扰人SPG6基因抑制Bcl-2、Bcl-xl的转录。结论:1.本研究证实SPG6在AML细胞系中呈现高表达;2.SPG6能够促进AML细胞系的生长并抑制细胞的凋亡;3.SPG6可抑制BMPR2的表达促进AML细胞的生长;4.SPG6通过抑制Smad信号通路促进AML细胞的生长。