【摘 要】
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背景人类白细胞抗原-G（Human leukocyte antigen-G,HLA-G）是一种非经典的主要组织相容性复合体Ⅰ（MHC-Ⅰ）类分子。作为一个免疫耐受分子,HLA-G最初发现在胎盘滋养层细胞上,为孕妇胎儿提供免疫耐受,也促进移植物耐受,降低炎症反应和免疫应答,有利于肿瘤细胞和病毒发生免疫逃逸。前期我们的研究发现,HTLV-1病毒感染Hela等肿瘤细胞后,免疫耐受分子HLA-G出现高表达
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背景人类白细胞抗原-G（Human leukocyte antigen-G,HLA-G）是一种非经典的主要组织相容性复合体Ⅰ（MHC-Ⅰ）类分子。作为一个免疫耐受分子,HLA-G最初发现在胎盘滋养层细胞上,为孕妇胎儿提供免疫耐受,也促进移植物耐受,降低炎症反应和免疫应答,有利于肿瘤细胞和病毒发生免疫逃逸。前期我们的研究发现,HTLV-1病毒感染Hela等肿瘤细胞后,免疫耐受分子HLA-G出现高表达,有助于HTLV-1病毒的传播和感染。近年来陆续有研究发现,血小板除了具有止凝血、形成血栓的作用外,在多种恶性肿瘤患者血液中都高表达,促进肿瘤细胞的生长、转移,协助逃避免疫系统监视。那么,在恶性肿瘤发生发展和病毒感染过程中,血小板和免疫耐受分子HLA-G之间是否有关联?HLA-G是否协助血小板促使病毒或肿瘤细胞者逃避宿主免疫监视?为解决这一科学问题,我们拟观察血小板上HLA-G的表达情况,研究血小板对HTLV-1感染的免疫调节作用。目的观察人类白细胞抗原G（HLA-G）在血小板上的表达情况,研究血小板表达的HLA-G在HTLV-1感染中的免疫调节作用。方法1.流式技术检测血小板上膜型mHLA-G:采集静脉全血,分离血小板,使用HLA-G特异性抗体对血小板进行荧光染色,通过流式技术检测血小板上膜型mHLA-G分子的表达情况。2.ELISA技术检测血小板裂解液中分泌型sHLA-G:无菌采集人的静脉全血,从非抗凝全血中分离血清,从EDTA-K2全血中分离获取浓缩血小板,然后再使用生理盐水稀释成不同浓度的血小板溶液,并通过迈瑞BC5800血常规分析仪检测不同稀释血小板溶液中血小板数量,将生理盐水稀释的不同浓度血小板,置于-80℃冷冻,37℃解冻,反复进行3个循环,制备成血小板裂解液（PL）,通过ELISA技术检测血清和不同浓度血小板裂解中分泌型sHLA-G分子的表达情况。3.Western blot技术检测血小板表达的HLA-G对HTLV-1病毒蛋白Tax的影响:使用1640培养基培养HTLV-1稳定感染的MT2细胞,（1）对照组:使用10%的胎牛血清培养基培养细胞;（2）实验组:使用10%的PL培养基培养细胞;（3）抗体阻断组:在10%的PL培养基中加入20 ng/ml抗HLA-G抗体（16913-1-AP）,培养MT2细胞。采用Western blot技术检测血小板表达的HLA-G对HTLV-1病毒蛋白Tax表达的影响。结果1.血小板上高表达mHLA-G:通过流式技术检测发现,血小板上高表达mHLA-G,实验组血小板mHLA-G显著高于空白对照组[（56.90±2.58）%vs（1.08±0.39）%],差异有统计学意义（P<0.01）;空白对照组与同型对照组无明显差异。2.血小板裂解液中sHLA-G的含量明显升高:通过ELISA技术检测发现,血清中含有极微量的sHLA-G,富血小板血浆（PRP）中含有少量的sHLA-G,明显高于血清,差异有统计学意义（P<0.01）。血小板裂解后,sHLA-G的含量明显升高,随着血小板浓度的升高,sHLA-G的含量升高,呈剂量依赖效应。3.HLA-G促进HTLV-1病毒蛋白Tax的表达:通过Western blot技术发现,与胎牛血清相比,血小板裂解液培养的MT2细胞高表达Tax、HLA-G蛋白,抗HLA-G抗体中和血小板裂解液中的HLA-G后可明显降低MT2细胞中Tax蛋白的表达。结论血小板上高表达免疫耐受分子HLA-G,且表达的HLA-G有助于HTLV-1病毒的感染。
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