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研究背景 羧胺三唑(carboxyamidotriazole，CAI)是一种钙离子跨膜内流抑制剂，也是细胞内多种需要钙离子参与的信号转导通路的抑制剂。体外研究发现，CAI具有抑制多种肿瘤细胞系的增殖、侵袭和转移的特性。这些肿瘤细胞系包括前列腺癌、胶质母细胞瘤、膀胱癌、肝癌、白血病以及乳腺癌等。在鸡胚脲囊素膜检测和大鼠动脉环分析实验中，CAI表现出抑制血管生成的活性。另外，CAI还能够抑制人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)的增殖。近来也有研究证实，CAI能够诱导细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖。 尽管许多研究对CAI的抗增殖、抗血管生成、抗转移以及诱导细胞凋亡的作用进行了很好的阐述，但是，CAI自身对肿瘤细胞细胞周期的调节作用尚未见报道。而且，人们对于CAI抗肿瘤作用的具体分子机制还了解甚少。因此，我们此项研究的目的就是检测CAI对人乳腺癌MCF-7细胞以及转染了SV40大T抗原的293T细胞的增殖抑制活性，探讨CAI诱导乳腺癌细胞周期阻滞和诱发细胞凋亡的信号转导通路，为目前正在开展的临床试验，以及CAI作为人乳腺癌的预防或治疗用药提供理论依据。 研究方法 我们采用台盼蓝染料排斥实验和四唑盐(MTT)分析法来检测CAI对细胞存活率的影响。通过相差显微镜观察CAI处理后MCF-7细胞的形态学变化。通过[~3H]-胸腺嘧啶掺入实验来分析CAI对细胞DNA合成的影响。另外，对细胞进行碘化丙啶染色，利用流式细胞仪检测细胞的DNA含量，评价CAI对细胞周期分布的影响。CAI对MCF-7细胞的凋亡诱导作用通过两种方法测定：应用流式细胞仪分析细胞的亚二倍体凋亡峰以及使用annexin V-FITC／PI凋亡检测试剂盒定量分析磷脂酰丝氨酸外翻。采用Rhodamine 123染色，流式细胞技术检测CAI长期孵育对线粒体膜电势的影响。利用荧光素—荧光素酶生物发光分析法检测细胞内的ATP含量。进行Western blot，