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背景：
复发葡萄胎(recurrent hydatidiform moles, RHM)是指同一个体发生两次及两次以上的葡萄胎，多发生在育龄期的妇女，给患者造成沉重的经济负担和心理压力。葡萄胎(hydatidiform mole, HM)是一个古老的疾病，年龄，种族和环境等多种因素可能影响HM的发生发展。过去的20年，随着分子遗传学研究水平不断提高，遗传因素在HM尤其是RHM的发病机制中的影响得到证实，并鉴定出双亲来源完全性葡萄胎(biparental hydatidiform mole, BiCHM)这一亚型,补充了对HM的认识。
2006年，加拿大的RimaSlim团队首先从家族性复发性葡萄胎(Family recurrent hydatidiform moles, FRHMs)，即一个家族有两个及两个以上复发性葡萄胎个体,筛查甄别出NLRP7基因为致病基因。后续英国等其他国家的实验数据均有力支持了这一观点，本团队在2007年亦从1个FRHMs筛查到NLRP7基因突变。RHM的发生是一个多阶段、多步骤、多因素共同作用逐步形成的，目前对于NLRP7基因突变导致RHM的致病机制尚缺乏更多的认识。
研究目的：
本研究通过对RHM患者测序比对分析甄别得到NLRP7基因突变患者，从蜕膜组织、细胞因子和细胞内蛋白印迹分析NLRP7基因突变导致的IL-1β差异表达，同时构建体外实验，进一步细分NLRP7基因不同域的点突变对IL-1β的影响。本研究还通过一系列预测工具，探讨NLRP7基因单点突变对蛋白改变及mRNA剪接调控的预测准确性。
研究方法：
1．收集自2011年至2017年期间前来妇科就诊的两次以上HM患者。以患者的病理妊娠组织做HE染色，由两名以上病理专家会诊判定为HM。对诊断为RHM的患者，以本课题组专利测序试剂盒进行NLRP7基因测序。汇总测序结果，分析中国人种NLRP7基因突变概况。
2．患者病理妊娠组织切片行IL-1β的免疫组化染色，与无NLRP7基因突变的BiCHM患者的病理妊娠组织IL-1β染色切片，定量分析。
3．收集NLRP7基因突变患者及对照外周血单核细胞。检测LPS刺激后细胞因子IL-1β和TNF-α的变化情况，衡量患者对于LPS的反应程度。
4．分析NLRP7基因突变的PBMCs内pro-IL-1β和mature-IL-1β与对照相比在刺激前后的表达变化及与不同突变位置之间的可能关联。
5．体外实验比对分析NLRP7不同突变位置对于IL-1β的影响。
6．汇总分析不同工具对于NLRP7外显子突变对蛋白致病性及mRNA剪接调控影响的预测准确性。
研究结果：
1．NLRP7基因突变在中国人RHM中的发生率低于已报道的其他人种，纯合突变率较于其他人种偏低，且突变多集中在LRR域。
2．NLRP7基因突变患者的蜕膜组织中IL-1β显著表达。
3．纯合与多点杂合致病突变患者PBMCs对LPS低反应。
4．依据突变的形式及位置，NLRP7基因突变在PBMCs中对于IL-1β的分泌和表达有差异性影响。
5．体外实验表明不同域的突变位点通过不同途径影响IL-1β。
6．对于NLRP7错义突变的致病性，不同的预测软件分析结果不一致。母源效应基因的突变预测应考虑蛋白和mRNA两个角度。
结论：
1．母体的局部免疫微环境可能与NLRP7基因突变RHM有一定的关联性。
2．NLRP7不同突变位置对IL-1β的剪切和/或加工产生影响。
复发葡萄胎(recurrent hydatidiform moles, RHM)是指同一个体发生两次及两次以上的葡萄胎，多发生在育龄期的妇女，给患者造成沉重的经济负担和心理压力。葡萄胎(hydatidiform mole, HM)是一个古老的疾病，年龄，种族和环境等多种因素可能影响HM的发生发展。过去的20年，随着分子遗传学研究水平不断提高，遗传因素在HM尤其是RHM的发病机制中的影响得到证实，并鉴定出双亲来源完全性葡萄胎(biparental hydatidiform mole, BiCHM)这一亚型,补充了对HM的认识。
2006年，加拿大的RimaSlim团队首先从家族性复发性葡萄胎(Family recurrent hydatidiform moles, FRHMs)，即一个家族有两个及两个以上复发性葡萄胎个体,筛查甄别出NLRP7基因为致病基因。后续英国等其他国家的实验数据均有力支持了这一观点，本团队在2007年亦从1个FRHMs筛查到NLRP7基因突变。RHM的发生是一个多阶段、多步骤、多因素共同作用逐步形成的，目前对于NLRP7基因突变导致RHM的致病机制尚缺乏更多的认识。
研究目的：
本研究通过对RHM患者测序比对分析甄别得到NLRP7基因突变患者，从蜕膜组织、细胞因子和细胞内蛋白印迹分析NLRP7基因突变导致的IL-1β差异表达，同时构建体外实验，进一步细分NLRP7基因不同域的点突变对IL-1β的影响。本研究还通过一系列预测工具，探讨NLRP7基因单点突变对蛋白改变及mRNA剪接调控的预测准确性。
研究方法：
1．收集自2011年至2017年期间前来妇科就诊的两次以上HM患者。以患者的病理妊娠组织做HE染色，由两名以上病理专家会诊判定为HM。对诊断为RHM的患者，以本课题组专利测序试剂盒进行NLRP7基因测序。汇总测序结果，分析中国人种NLRP7基因突变概况。
2．患者病理妊娠组织切片行IL-1β的免疫组化染色，与无NLRP7基因突变的BiCHM患者的病理妊娠组织IL-1β染色切片，定量分析。
3．收集NLRP7基因突变患者及对照外周血单核细胞。检测LPS刺激后细胞因子IL-1β和TNF-α的变化情况，衡量患者对于LPS的反应程度。
4．分析NLRP7基因突变的PBMCs内pro-IL-1β和mature-IL-1β与对照相比在刺激前后的表达变化及与不同突变位置之间的可能关联。
5．体外实验比对分析NLRP7不同突变位置对于IL-1β的影响。
6．汇总分析不同工具对于NLRP7外显子突变对蛋白致病性及mRNA剪接调控影响的预测准确性。
研究结果：
1．NLRP7基因突变在中国人RHM中的发生率低于已报道的其他人种，纯合突变率较于其他人种偏低，且突变多集中在LRR域。
2．NLRP7基因突变患者的蜕膜组织中IL-1β显著表达。
3．纯合与多点杂合致病突变患者PBMCs对LPS低反应。
4．依据突变的形式及位置，NLRP7基因突变在PBMCs中对于IL-1β的分泌和表达有差异性影响。
5．体外实验表明不同域的突变位点通过不同途径影响IL-1β。
6．对于NLRP7错义突变的致病性，不同的预测软件分析结果不一致。母源效应基因的突变预测应考虑蛋白和mRNA两个角度。
结论：
1．母体的局部免疫微环境可能与NLRP7基因突变RHM有一定的关联性。
2．NLRP7不同突变位置对IL-1β的剪切和/或加工产生影响。