美藤果粕多肽降血糖和降血脂活性研究

来源 :华南理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fuzhi2009
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美藤果作为引进的油料作物,富含丰富的蛋白质和脂肪酸,其脂肪酸的生物活性得到了广泛研究,但关于美藤果蛋白质和多肽的药理活性报道较少,本文对美藤果粕粗蛋白酶解多肽的降血糖血脂活性进行了研究和比较,进一步拓展了美藤果的使用和药用价值。使用超声碱溶酸提法提取美藤果粕粗蛋白的蛋白含量为74.00±0.43%。测定了不同蛋白酶酶解粗蛋白所得酶解物的水解度、多肽含量、疏水性和分子量主要分布,复合蛋白酶水解物(Sacha inchi meal protein compound protease hydrolysate,SPr和碱性蛋白酶水解物(Sacha inchi meal protein alkaline protease hydrolysate,SAl)的水解度较高,但多肽含量较低,酶解物有一定的疏水性,分子量主要分布在0-1k D内。6个酶解物对ABTS自由基有较高的清除率,其中SAl在5 mg/m L的浓度下,可完全清除ABTS自由基,酶解物对α-淀粉酶的抑制作用较弱,并且显著提高了α-葡萄糖苷酶的活力,SPr和SAl对DPP-Ⅳ的抑制作用较明显,IC50值分别为1.007 mg/m L和2.130 mg/m L,对胰脂肪酶抑制活性较好的四个组分胃蛋白酶水解物(Sacha inchi meal protein pepsin hydrolysate,SPe)、木瓜蛋白酶水解物(Sacha inchi meal protein papain hydrolysate,SPa)、胰蛋白酶水解物(Sacha inchi meal protein,STr)和菠萝蛋白酶水解物(Sacha inchi meal protein bromelaine hydrolysate,SBr)的IC50值分别为34.96、25.40、24.49、22.90 mg/m L。依据美藤果粕粗蛋白酶解物对二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)和胰脂肪酶抑制的可逆性,分别从DPP-Ⅳ和胰脂肪酶抑制活性较好的酶解物和通过超滤-亲和色谱法分离的组分中鉴定了DPP-Ⅳ和胰脂肪酶潜在活性抑制肽,并通过分子对接筛选了10个DPP-Ⅳ、14个胰脂肪酶潜在抑制肽进行固相合成,验证其活性。美藤果粕粗蛋白酶解物中筛选的对DPP-Ⅳ抑制活性较好的多肽GF-6、WH-4、AI-9、FA-9的IC50值分别为75.75 m M、128.40m M、209.50 m M和325.90 m M,超滤-亲和色谱法筛选的对DPP-Ⅳ抑制活性较好的多肽AQ-7、AV-9和LY-6的IC50值分别为23.43 m M、53.11 m M和79.92 m M。GF-6、WH-4、AQ-7、AV-9和LY-6对DPP-Ⅳ的抑制类型分别为以竞争型为主的混合型抑制、以非竞争型为主的混合型抑制、非竞争型抑制、竞争型抑制和竞争型抑制。GF-6、AQ-7与DPP-Ⅳ分别有两个结合位点,且相互作用自发进行,之间存在氢键、范德华力、疏水性和静电力相互作用。美藤果粕粗蛋白酶解物中筛选的对胰脂肪酶抑制活性较好的多肽NV-7、WK-5、WK-8的IC50值分别为34.01 m M、246.50 m M、52.79 m M;超滤-亲和色谱法筛选的对胰脂肪酶抑制活性较好的多肽EY-8和FK-9的IC50值分别为171.00 m M和55.13 m M。NV-7、WK-5、WK-8、EY-8和FK-9对胰脂肪酶的抑制类型分别为以竞争型为主的混合型抑制、以非竞争型为主的混合型抑制、非竞争型抑制、以竞争型为主的混合型抑制和竞争型抑制。NV-7与胰脂肪酶之间存在两个结合位点,相互结合的自发反应由焓变驱动,氢键、范德华力是NV-7与胰脂肪酶间的主要相互作用力,FK-9与胰脂肪酶有一个结合位点,疏水和静电相互作用是FK-9与胰脂肪酶结合的主要驱动力。各酶解粗肽可显著促进胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)-Hep G2葡萄糖消耗,组分SPa、STr和SPr可有效降低油酸诱导的Hep G2细胞内的脂肪累积和TG含量。多肽GF-6、AQ-7、NV-7和FK-9对IR-Hep G2葡萄糖消耗的影响不明显,但可极显著地降低Hep G2细胞内的脂肪累积、甘油三酯(Triglycerides,TG)和活性氧水平。
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