吩噻嗪光敏剂修饰磁性微粒的制备及其在病毒灭活中的应用

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本文研究了表面修饰有环氧乙烷基和羧基的功能化磁粒的制备,将对血液或血液制品中的HIV、HBV及HCV等病毒有很强的光诱导灭活作用的吩噻嗪类染料,如天青A和天青B,通过化学反应共价偶联到硅烷化的磁粒上的几种方法,制备了既可灭活血液或血液制品中的病毒、又可以用磁性分离方式将其彻底去除的血液净化材料。该材料应用于几种血液样品中指示病毒PRV的灭活,建立了用CPE实验结合Reed-Muench法评价其灭活病毒的效率的方法,鉴定了所合成的光敏剂修饰磁性微粒的光诱导的病毒灭活活性。材料合成部分中,首先用化学共沉淀法制备Fe3O4磁流体,磁流体经硅烷化修饰分别得到表面羧基化和环氧化的磁性载体。羧基化磁粒用EDC或DCC活化剂介导酰胺缩合反应将AA或AB固定;环氧化磁粒用采用金属三氟化物催化、离子超声催化和碱催化等3种方法,催化环氧乙烷基和芳香胺的开环加成反应,从而将AA或AB固定。初步比较各种方法,发现碱催化的方法使光敏剂偶联量效果最好,然后进一步对碱催化的合成方法优化以提高偶联量。用优化的合成方法制备该材料,并检测批内和批间差异,考察了偶联量的稳定性。UV-Vis分光光度法测定AA和AB的偶联量分别达到50nmol/mg和37 nmol/mg。研究了光敏剂的吸光度与溶液酸碱度的关系,为用盐酸溶解磁粒分光光度法测定偶联量提供了指导。研究了AA和AB的碱性稳定性,得到两者氧化分解的pH上限值分别为11.5和12.0,为合成体系优化中pH值的确定提供了指导。以DPCI为单线态氧捕捉剂,用氧化-萃取光度法测定单线态氧产率,来分析磁粒的光敏剂的偶联量,鉴定了光敏剂修饰磁粒的光敏活性。选用PRV为指示病毒,从光照时间、光敏剂修饰磁粒用量等影响光化学效应的主要因素入手,优化了光化学灭活病毒的体系,并应用于血浆、血红蛋白溶液及人血液代用品(聚合猪血红蛋白)中指示病毒的光化学灭活。结果显示该磁性材料灭活效果优良,能使被试样品中病毒滴度下降达4个LgTCID50以上。光敏剂修饰磁粒把磁性微粒的优良生物相容性、磁场中的易分离性与吩噻嗪光敏剂灭活病毒的高效性相结合,将很可能是用于血液净化的新型材料。
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