【摘 要】
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家禽的胚胎发育与哺乳动物有着很大的不同，由于胚胎发育的特殊性，使得家禽不易获得单细胞受精卵和早期胚胎。借助于胚胎干细胞技术平台生产转基因家禽的研究具有重要的实用价值
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家禽的胚胎发育与哺乳动物有着很大的不同，由于胚胎发育的特殊性，使得家禽不易获得单细胞受精卵和早期胚胎。借助于胚胎干细胞技术平台生产转基因家禽的研究具有重要的实用价值，原始生殖细胞(Primordial germcells，PGCs)作为配子最初可识别的祖先细胞，在鸡胚胎的早期发育过程中有其独特的迁移规律，从而能被分离提取，并可移植到同种胚胎中，发育成有功能的配子。本研究将完成鸡原始生殖细胞的分离、培养及转基因的实验研究。
以莱航鸡rDNA基因(rRNA的基因)及其间隔序列作为同源重组引导序列，构建含GFP基因和hIFN基因的载体，采用原始生殖细胞介导技术进行转基因，主要研究内容如下：
(1) 鉴定已经构建好的含GFP基因和hIFN基因的载体，并将鉴定为阳性的载体进行扩大培养并大量抽提；
(2) 取孵化至第19期或第28期的鸡胚，挑取其生殖嵴或者性腺，胰酶消化获得原始生殖细胞，并辅以饲养层和生长因子进行培养；
(3) 采用脂质体介导的方法在原始生殖细胞内进行基因转移，于转基因后48小时观察到绿色荧光细胞；
(4) 对存活的细胞采用PCR、测序等方法进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定，结果表明GFP、hlFN已转入细胞。
本研究成功的将鸡胚原始生殖细胞进行分离培养并将外源基因转染进鸡的原始生殖细胞。
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