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伪狂犬病(Pseudorabies,PR又称Aujeszky’s disease,AD)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的急性传染病,猪是该病的天然贮存宿主。当前,猪伪狂犬病在全世界广泛流行,尤其是养殖密度较大的国家,是当前危害养猪业最为严重的传染病之一,每年给全球养猪业造成无法估量的经济损失。2011年之前得益于Bartha-K61基因缺失疫苗的普遍利用,辅以g E-ELISA区别诊断手段的应用,PR在我国获得良好的控制。但于2011年下半年开始,我国个别省市应用PRV传统疫苗免疫的猪群接连发生疑似伪狂犬病疫情,并不断分离到病毒。有学者研究显示,分离毒株抗原性相比于传统毒株发生显著变异,PRV传统疫苗免疫后刺激机体产生的抗体,无法有效中和新分离病毒株,从而不能对猪只构成完全的保护。自此,关于PRV变异毒株的报道越来越多,对其研究也日趋成为热点。为了解山东省PR流行情况,本研究对2015~2017年本实验室搜集的PR临床样品进行了系统流行病学调查,包括猪群发病情况调查、病理学观察、病原学检测、病毒分离鉴定及PRV g E抗体ELISA检测。另外,对PRV分离株的主要基因进行了序列测定及遗传变异分析。发病情况调查显示不同阶段猪只感染PRV的症状表现明显不同:母猪以流产、死胎、木乃伊胎为特征;产房仔猪表现明显的神经症状及高死亡率;生长猪则呈类似流感的呼吸道症状。重症感染病例的剖检病变可见脾脏、肝脏密布灰白色坏死灶;肺脏充血、肿胀,肺表面也可见灰白色坏死灶;肾脏表面及切面皮质部可见针尖大出血点或灰白色坏死灶;扁桃体坏死溃疡;淋巴结充血坏死;脑膜充血、水肿。组织病理学观察主要呈现非化脓性脑炎;脾脏、肝脏、扁桃体及淋巴结等的坏死性炎症,在肝细胞、扁桃体隐窝黏膜上皮细胞、神经元、支气管黏膜上皮细胞等易检到核内嗜酸性包涵体;间质性肺炎及出血性肾炎,并可见有大量淋巴细胞浸润的坏死灶。病理学观察结果表明目前山东省流行的PRV致病性强并具有组织泛嗜性的特征,患病猪特征病变明显。在送检的1132份病例中,190份经PCR检测为PRV g E阳性,阳性率为16.78%(190/1132),并且发病季节性越来越不明显,由之前寒冷的冬春季多发转为目前的四季常发,目前山东省流行的PR具有高致病性变异毒株的流行特点。PRV g E抗体ELISA检测结果显示,13005份血清中,有6598份阳性,阳性率50.73%,并且不同地区伪狂犬野毒抗体阳性率差别不大,介于45.78%~54.19%之间,而不同猪群伪狂犬野毒抗体阳性率的差别也较小,介于41.07%~57.39%之间,抗体检测结果显示当前山东省各地区猪伪狂犬病野毒感染情况仍极其普遍,并且阳性率居高不下。最后,通过细胞接毒培养分离到24株PRV并对g E、g C、g D、TK基因进行了序列测定及遗传变异分析,结果显示山东省分离株与国内报道的PRV变异株同源性较高,而与欧美毒株的遗传距离较远。综上结果表明,目前山东省伪狂犬感染压力较大,且流行的PRV主要为变异强毒株。另外,本研究中PRV分离株全部分离自应用PRV传统疫苗常规免疫的猪场,说明当前普遍使用的Bartha-K61疫苗株对PRV变异株的感染无法提供有效保护,所以构建新的基因缺失突变株疫苗和研制双价或多价载体疫苗将是以后猪伪狂犬病疫苗发展的重要目标。