【摘 要】
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内生真菌在植物中的存在具有普遍性,对宿主的生长发育和系统演化有着重要作用.国内外已分离出不少植物内生真菌,其中有一些菌株还能产生与宿主所产相同甚至不同的可治人类疾
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内生真菌在植物中的存在具有普遍性,对宿主的生长发育和系统演化有着重要作用.国内外已分离出不少植物内生真菌,其中有一些菌株还能产生与宿主所产相同甚至不同的可治人类疾病的药物,但我们对内生真菌的认识还相当肤浅,许多方面还处于猜测和假设阶段.对植物内生真菌全面而又系统地研究,不但有利于认识真菌资源,为深入研究真菌的生物多样性问题作贡献,而且还能为今后对内生真菌的开发利用打下基础.自然界中存在大量的内生真菌资源急待我们去研究,但从宿主中分离出内生真菌还仅仅是对其研究的开始,即使就内生真菌的分离培养和分类鉴定来看,经典方法尚有诸多难以解决的问题.因此,将分子生物学和基因工程技术用于内生真菌的深入研究已经越来越受到重视.RAPD技术在对物种基因组没有任何生物学资料的情况下能够很方便地对其进行DNA多样性分析,故它在生物种群区分和品种鉴定方面显示了巨大的潜力和优势.该文用氯化苄法对抗癌药用植物内生真菌DNA进行了提取研究,比较了在不同条件下内生真菌DNA的提取效果,确立了高效、优质的内生真菌DNA提取方案;对影响RAPD-PCR扩增的多种因素进行了研究,确立了针对不同内生真菌的可行的反应体系和循环参数.从160个随机引物中筛选出了105个多态性好的引物;选用了其中21个引物对6株青霉菌进行了RAPD标记研究,总共扩增出221个位点,其中多态性位点184个,多态条带比率(PPB)为83.26％.用NTSYspc2软件分析表明:E14与E24,E12与E11,E13与E6的相似系数较高,这与它们的培养特征和经典分类结果是一致的,说明RAPD分子标记可用于内生真菌的分类鉴定.RAPD标记是直接对内生真菌基因组DNA进行扩增,分析其多态性,避免了接种培养鉴定过程中一些无法克服的缺陷,因而具有较高的可比性:选用了15个引物对37株不同属内生真菌进行了RAPD研究,分析了它们的遗传多态性、遗传多样性和亲缘关系.结果表明大部分菌株之间的关系与经典分类结果是相吻合的.该文还用低熔点琼脂糖包埋Taq酶的方法为改进RAPD技术作了试探性的研究.结果表明,改进后的技术不但具有传统RAPD-PCR技术的简单、快速、灵敏等优点,而且还提高了RAPD扩增的重复性和稳定性;用了4个引物(OPA-09、OPH-20、OPS-11、OPY-20)对37株内生真菌进行了扩增,每个菌株都能扩增出清晰、稳定的谱带.
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