【摘 要】
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MicroRNA (miRNA）在生物体内起着重要的调控作用，对miRNA 生物功能的研究在早期疾病诊断和新药的开发方面有着广泛的应用前景，研究简便、快速、高灵敏和特异性好的miRNA 检测新
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MicroRNA (miRNA）在生物体内起着重要的调控作用，对miRNA 生物功能的研究在早期疾病诊断和新药的开发方面有着广泛的应用前景，研究简便、快速、高灵敏和特异性好的miRNA 检测新方法对miRNA的研究具有重要的意义。本论文中，以miRNA为模板，在纳米金上实现了DNA 探针之间的连接，导致纳米金的交联聚集，从而建立了通过颜色变化检测miRNA的简便方法。方法简单、易操作、无需任何扩增技术、及昂贵的仪器，通过肉眼观察即可获得检测结果，因此方便实用。本方法的局限性是无法在纳米金上实现连接酶链式反应（LCR），因此，检测限受到了限制。在此基础上，我们以miRNAs 为模板，用T4 RNA ligase 2 选择性的连接DNA 探针，引发LCR，用琼脂糖凝胶电泳技术分离、检测，建立了一种简单、快速、灵敏并且选择性较好的检测miRNA的方法。本方法检测限约为0.7 pmol/L (3 σ，n = 7)，产物的灰度值在2.0 pmol/L ～2.0nmol/L的浓度范围内与浓度成很好的相关性。本方法检测Let-7a 不仅灵敏度高，而且能很好的区分只有单碱基差别miRNA。并已成功应用于实际样品肺部总RNA中Let-7a含量的测定，结果良好。针对所要检测的miRNA 设计合适的探针，本方法可应用于各种miRNA的检测，因此，对miRNA的检测具有很好的应用前景。
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