【摘 要】
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为了得到既有溶栓能力,又有抗栓活性的新型分子,构建了尿激酶原(Pro-urokinase,Pro-q(k)和蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)的嵌合分子.利用定点突变技术,将Pro-UK的终止密码子
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为了得到既有溶栓能力,又有抗栓活性的新型分子,构建了尿激酶原(Pro-urokinase,Pro-q(k)和蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin,Ecs)的嵌合分子.利用定点突变技术,将Pro-UK的终止密码子置换成Cla I位点, 并加上两个甘氨酸的密码子.Cla I 利于Ecs的引入,甘氨酸可保持两个分子连接部位的柔韧性.经DNA重组,得到两个转移载体pAcYT-uPAEcs-I和pBacPAK9-uPAEcs-Ⅱ.将它们分别与野生型AcNPV DNA和线性化的AcNPV DNA(BacPAK6/Bsu36 I digest)共转染昆虫sf9细胞.前者经过两轮有限稀释法的筛选,筛到不含野生型病毒的重组病毒,纤维蛋白平板法测活表明其表达量最高可达1500IU/ml.后者不需筛选,直接用共转染细胞上清去反复感染细胞,从而增加重组病毒的滴度.SDS-PAGE,质谱分析和纤维蛋白自显影的结果表明,表达的嵌合分子的分子量约为53.5KD,与预期相符.血小板聚集试验表明,该嵌合分子除了具有与Pro-UK相等的溶栓活性外,还具有明显的抑制血小板聚集的活性.
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