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氧化损伤是造成人体衰老和引起癌症等疾病的重要原因,抗氧化药物可以清除体内的活性氧物种,减少氧化损伤,起到预防疾病的作用。在人体内,抗氧化药物需要透过细胞膜才能起到抗氧化作用。现有的体外抗氧化剂评价方法基于药物在溶液环境中清除自由基等活性氧物种的能力,没有考虑药物透膜过程,与体内作用机理有差距。而体内方法又过于繁琐,实验周期长,成本较高。本文综述了活性氧物种特别是羟基自由基对人体造成氧化损伤的机理,小结了常用的氧化损伤检测方法、自由基检测方法和抗氧化性评价方法,并对利用模拟细胞屏障研究药物吸收的方法做了简要评述。在此基础上研究了抗氧化性药物捕获自由基能力的评价方法和模拟细胞屏障的建立和表征。实验工作包括以下两部分:
1.建立了检测抗氧化剂捕获自由基能力的方法。罗丹明B被Fenton反应产生的羟基自由基氧化生成非光活性产物,造成550nm处的吸光度下降,而抗氧化剂可以捕获体系中的羟基自由基,防止罗丹明B被氧化,从而使吸光度有所恢复。基于吸光度恢复对抗氧化剂剂量的响应情况建立了评价自由基捕获能力的模型。这一方法以抗坏血酸为标准物,在多种物质的抗氧化活性检测中表现了良好的灵敏度和重现性。
2.合成了非离子表面活性剂囊泡作为模拟细胞屏障,用联吡啶钌作为水相探针包封于囊泡内,用β-胡萝卜素作为膜相探针组装于囊泡的膜相中;在表征方法上,除了通过透射电子显微镜观察到囊泡的形貌外,还利用共振光散射方法在不需分离游离探针的情况下表征了包封于囊泡内的水相探针,并用强度比实现了对浓度的线性响应,膜相探针则利用同步荧光结合荧光比的方法得到校准曲线,避免了背景散射光的干扰。