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目的探讨低氧下食管癌EC9706细胞对化疗药物顺铂的敏感性及启膈散增强低氧下食管癌EC9706细胞顺铂敏感性机制。方法1采用MTT法检测常氧和低氧下不同顺铂浓度(低浓度:0.35μg·m L-1、中浓度:0.70μg·m L-1、高浓度:1.18μg·m L-1)对食管癌EC9706细胞活性的影响;2采用流式细胞术(FCM)PI染色法检测常氧和低氧下不同浓度顺铂对细胞周期的影响;3采用流式细胞术(FCM)Annexin V/PI双染法检测常氧和低氧下不同浓度顺铂对细胞凋亡的影响;4 MTT法检测低氧下不同浓度下启膈散含药血清、顺铂单用或启膈散含药血清联合顺铂应用对EC9706细胞活性的影响;5 FCM PI染色法、Annexin V/PI双染法检测低氧下启膈散含药血清(v/v,8%)、顺铂单用(0.5μg·m L-1,1.0μg·m L-1)或启膈散含药血清(v/v,8%)联合顺铂(0.5μg·m L-1,1.0μg·m L-1)应用对食管癌EC9706细胞周期、细胞凋亡的影响;6逆转录实时荧光定量PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测低氧下启膈散含药血清、顺铂单用或启膈散含药血清联合顺铂应用EC9706细胞miR-21及其下游分子programmed cell death protein 4(PDCD4)、phosphatase and tensin homologdeleted on chromosome ten(PTEN)m RNA表达量;7 Western blot法检测低氧下启膈散含药血清、顺铂单用或启膈散含药血清联合顺铂应用EC9706细胞PDCD4、PTEN蛋白表达量。结果1 MTT法检测结果显示,常氧和低氧下顺铂分别作用细胞48h后,随着顺铂浓度的增加,其吸光度(absorbance,A)逐渐降低;与常氧下同顺铂浓度相比,低氧下各组A值均高于常氧下,组间比较差异具有显著性统计学意义(P<0.05);顺铂作用细胞48h后的IC50值,常氧组为1.18±0.05μM,低氧组为2.68±0.06μM,组间比较差异有显著性统计学意义(P<0.05)。2流式细胞术检测细胞周期结果显示,低氧对照组较常氧对照组S期细胞增多,组间差异具有显著性统计学意义(P<0.05);常氧下顺铂处理组与对照组相比较,S期细胞增多,G1期细胞减少,组间差异具有显著性统计学意义(P<0.05),其中,顺铂低、中浓度组较对照组S期细胞数增加、G1期细胞减少更为显著(P<0.05);低氧下顺铂处理组与对照组相比较,S期细胞数增加,G1期细胞减少,组间差异具有显著性统计学意义(P<0.05);低氧与常氧下同浓度顺铂处理组比较,低氧下S期细胞明显增多,组间差异具有显著性统计学意义(P<0.05)。3 Annexin V/PI双染检测细胞凋亡结果显示,常氧与低氧下顺铂处理各组分别与其对照组相比,细胞凋亡率增加,且呈剂量依赖性,组间差异具有显著性统计学意义(P<0.05);低氧与常氧下同浓度顺铂处理组相比较,细胞凋亡率降低,组间差异具有显著性统计学意义(P<0.05)。4启膈散含药血清在浓度为8%(含8%含药血清的RPMI 1640培养基)、10%(含10%含药血清的RPMI 1640培养基)与1.0μg·m L-1顺铂合用吸光度值(A值)显著低于启膈散含药血清组、顺铂组,其药物相互作用系数(coefficient of drug in interaction,CDI)分别为0.90、0.94。5与对照组相比,顺铂低浓度组、顺铂高浓度组、启膈散含药血清组、联合低浓度组、联合高浓度组,S期细胞数量均增多,组间差异有显著性统计学意义(P<0.05)。6与对照组相比较,各组细胞凋亡率均升高,组间差异有显著性统计学意义(P<0.05);联合高浓度、联合低浓度与同浓度顺铂组相比,细胞凋亡率均升高,且联合高浓度组凋亡率高于联合低浓度组,组间差异有显著性统计学意义(P<0.05)。7与对照组相比较,顺铂高浓度组、联合高浓度组、联合低浓度组miR-21表达量低于对照组,组间差异有显著性统计学意义(P<0.05);联合高、低浓度组miR-21表达量低于同浓度顺铂组(P<0.05),且高浓度组低于低浓度组(P<0.05),组间差异有显著性统计学意义。8与对照组相比较,顺铂高浓度组、启膈散含药血清组PDCD4 m RNA表达量显著低于对照组,组间差异有显著性统计学意义(P<0.05);联合高、低浓度组PDCD4 m RNA、PTEN m RNA表达量高于对照组,组间差异有显著性统计学意义(P<0.05);同时,联合高、低浓度组PDCD4 m RNA、PTEN m RNA显著高于同浓度顺铂组(P<0.05),且联合高浓度组PDCD4 m RNA、PTEN m RNA表达高于低浓度组(P<0.05),组间差异有显著性统计学意义。9与对照组相比,联合高、低浓度组PTEN蛋白表达升高(P<0.05),且联合高、低浓度组PTEN蛋白明显高于同浓度单独应用顺铂组,组间差异有显著性统计学意义(P<0.05);顺铂高浓度组、顺铂低浓度组、联合高浓度组、联合低浓度组PDCD4蛋白高于对照组(P<0.05),联合高浓度组显著高于同浓度顺铂组和联合低浓度组(P<0.05),组间差异有显著性统计学意义。结论1低氧下食管癌EC9706细胞对顺铂的敏感性较常氧下显著性降低,与低氧下EC9706细胞的活性较常氧下高,S期细胞较常氧下高,细胞凋亡率较常氧低相关。2低氧下启膈散含药血清对顺铂抑制EC9706细胞活性有协同作用。3低氧下启膈散含药血清对顺铂诱导的细胞凋亡有协同作用。4低氧下启膈散含药血清对顺铂抑制EC9706细胞活性的协同作用机制可能为抑制miR-21的表达,升高其下游因子PDCD4及PTEN的表达,从而促进食管癌EC9706细胞凋亡。