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目的 研究新生大鼠星形胶质细胞(AC)β1整合素和MMP-2在缺氧/复氧损伤及FDP干预处理后的表达变化和二者之间的相关性,探讨β1整合素和MMP-2在星形胶质细胞缺氧/复氧损伤中的作用、作用机制和FDP对星形胶质细胞缺氧/复氧损伤β1整合素和MMP-2表达的影响,为缺氧缺血性脑损伤的机制和治疗提供实验及理论依据。
方法原代培养成熟纯化的AC随机分成五组:(1)缺氧组:AC在1%氧,无糖无血清的培养基中分别培养12h和24h。
(2)FDP保护组:AC在1%氧,无糖无血清、加入FDP20μ1/ml的培养基中分别培养12h和24h。
(3)复氧组:AC按缺氧组处理12h后更换为普通常氧培养,分别培养6h,12h和24h。
(4)FDP治疗组:AC按缺氧组处理12h后更换为普通常氧培养,且在培养基中加入FDP20μl/ml,分别培养6h,12h和24h。
(5)对照组:常氧培养组。每一个样品采用光镜和扫描电镜分别观察AC胞体、足突和相互连接的改变;real-timePCR检测β1整合素mRNA表达水平;免疫荧光检测β1整合素和MMP-2蛋白表达水平。
结果1、随着缺氧/复氧时间延长,AC形态变化明显,主要表现为细胞间连接减少,胞体缩小,足突减少;FDP保护12h组及FDP治疗6h组,AC形态变化明显减轻。
2、随着缺氧/复氧时间延长,β1整合素mRNA和蛋白在AC的表达明显降低(P<0.05);FDP保护组较相应时段缺氧组β1整合素mRNA和蛋白表达均明显增加(P<0.05);FDP治疗组较相应时段复氧组β1整合素mRNA和蛋白表达也明显增加(P<0.05)。
3、随着缺氧/复氧时间延长,MMP-2蛋白在AC的表达明显增高(P<0.05);FDP保护组较相应时段缺氧组MMP-2蛋白表达均明显降低(P<0.05);FDP治疗组较相应时段复氧组β1整合素mRNA和蛋白表达也明显减少(P<0.05)。
4、在缺氧/复氧损伤时,AC的β1整合素和MMP-2蛋白表达具有负相关关系。
结论1、在AC缺氧/复氧损伤时,β1整合素表达下降,MMP-2表达增高,与此同时AC间的相互连接破坏,其可能影响AC正常形态、功能的维持。
2、FDP可能通过增加β1整合素的表达、降低MMP-2的表达,以维持AC间相互连接和AC的正常形态,减轻缺氧/复氧对AC的损伤。