斑马鱼DMRT5基因的克隆及其功能研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bell0521
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含有DM结构域的蛋白首先是作为与性别决定和分化相关的因子被发现的,随着越来越多物种的多个含有DM结构域的基因被克隆得到,这些基因明显构成了一个基因家族,即DMRT家族。除哺乳类DMRT8基因除外所有的DMRT基因有着一个共同的特征,就是都含有具DNA结合能力的在序列上高度保守的DM结构域,即类锌指DNA结合基序。尽管DMRT2、DMRT4和DMRT5基因还存在在性腺之外的功能已被报道,大多数DMRT基因,并且包括上述提到的基因,在配子发生(gametogenesis)的过程中确实有表达。DMRT5以及DMRT4很可能同为玻璃海鞘(Ciona)DMRT1基因的直系同源(orthologs)。DMRT1基因已被报道对头端神经板(anterior neural plate)的发育有很关键的作用。但关于DMRT5的功能仍然没有相关的研究报道,这很可能是由于在大多数脊椎动物中DMRT5和DMRT4相互之间可能有功能冗余的原因。在本研究中,我们发现在斑马鱼中仅仅只有DMRT5存在而没有DMRT4,这一特征十分有利于我们对斑马鱼的DMRT5进行功能分析。我们制作了一个有条件表达DMRT5的显性负性突变体(dominant-negative)的转基因鱼,通过这个转基因鱼我们可以不仅仅在胚胎发生的各早期时期中,还可以在成年雄性斑马鱼的生殖细胞发育过程中这样晚的时期中研究DMRT5的功能。我们的实验结果显示,使DMRT5失去功能之后,fgf8a和emxl这两个端脑标志基因的表达在胚胎发育时期中有显著变化,并且cdkn2c的表达在精子发生过程中被显著抑制。蛋白结合分析也进一步证明DMRT5在精子发生过程中通过与cdkn2c的启动子序列直接结合来调控它的表达。  
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