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布鲁氏菌病（简称“布病”），是由布鲁氏菌（Brucella）侵入动物机体引起的传染性共患疾病。不仅危害动物机体，而且在与其相关食品和物品中传播，严重危害畜牧业发展，威胁人类生命健康。布病在我国波及多个地区，且发病率逐年上升，频繁发生的疫情，已成为影响畜牧业良性发展的一大难题。本研究对Omp31的基本性质进行了分析，并作出表位预测。发现布鲁氏菌Omp31可分为两大类Omp31-a和Omp31-b。本实验选用的猪型布鲁氏菌S2减毒活菌苗中的Omp31蛋白属于Omp31-a亚类。对该菌Omp31蛋白的各项分析显示：该蛋白是一种β折叠桶形的跨膜脂蛋白质；分子N末端具有信号肽序列；在48-74及193-227两处氨基酸残基序列，作为抗原决定簇所在区域的可能性较大。此外，本文以猪型S2菌基因组DNA为模板，PCR扩增获得omp31、bls全长基因片段，omp3148-74抗原表位基因片段和N端缺失27个碱基的bls基因片段。bls全长基因片段插入pET-28a质粒载体，成功构建重组质粒载体pET-bls，经PCR、双酶切和测序鉴定正确后，IPTG诱导表达出目的重组蛋白rBLS。omp31抗原表位基因片段和N端缺失27个碱基的bls基因片段通过融合PCR进行重组后，插入pET-28a质粒载体，成功构建重组质粒载体pET-omp3148-74-bls，经PCR、双酶切和测序鉴定正确后，IPTG诱导表达出目的重组蛋白rOmp3148-74-BLS。SDS-PAGE分析显示：两种重组蛋白均以包涵体形式存在，经包涵体处理和His-tag亲和层析柱纯化，分别得到21kD和23kD重组蛋白。利用两种重组蛋白免疫家兔，获取的抗血清通过Western blot实验检验其免疫效果，结果显示：两种蛋白均能被兔血清特异性识别，而空白对照并不与抗血清产生特异性反应，证明目的蛋白具有良好的抗原特异性，有望应用于布鲁氏菌相关疫苗的研制。