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目的：从中药广金钱草中提取、分离得到广金钱草总黄酮(TFDS),采取L-羟脯氨酸喂饲诱导建立大鼠肾草酸钙结石模型,观察TFDS对大鼠结石形成及结石相关生化指标的影响明确疗效,通过检测氧化应激指标及炎症相关蛋白的表达探讨TFDS抗结石的可能机制。方法：采用乙醇对广金钱草进行回流提取,所提浸膏经大孔树脂分离及纯化,从而得到广金钱草总黄酮,通过LC-MS/MS技术进行质量控制。采用L-羟脯氨酸(HLP)喂饲法诱导创立一个关于大鼠的肾草酸钙结石的模型。SPF级雄性Sprague-Dawley大鼠(180-220g)40只,随机分成5组(n=8)：空白(Control)组、TFDS对照组、成石组(HLP)、TFDS低剂量治疗组和TFDS高剂量治疗组。空白组随意获取正常的鼠粮,蒸馏水饮水；TFDS对照组在Control组基础上用灌胃的方法给予TFDS 400 mg/kg/d；成石组自由摄取5%HLP特制鼠粮,蒸馏水饮水；TFDS低剂量治疗组在成石组基础上灌胃给予TFDS 100mg/kg/d；TFDS高剂量治疗组在成石组基础上灌胃给予TFDS 400 mg/kg/d.各组大鼠在相同条件下饲养28天后将大鼠的尿液收集、血液收集及双肾的标本进行收集。其中,大鼠尿液用于检测尿量、pH值、尿钙、尿镁、尿肌酐、尿蛋白、尿结晶、尿草酸及枸橼酸；大鼠血液用于生化血CR(肌酐)的检测及BUN(血尿素氮)浓度；将左侧肾脏组织制成10%匀浆,测定其MDA.SOD.CAT和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量了解OS情况；右肾组织在显微镜下观察病理学改变和结晶沉积情况,免疫组化检测骨桥蛋白(OPN)、单核细胞趋化因子(MCP-1)和转化生长因子-β(TGF-p)等炎症相关蛋白的表达。结果：从广金钱草中分离出纯度为68.34%的TFDS,LC-MS/MS分析初步证实含有夏佛塔苷、异荭草苷和异牡荆苷等黄酮类单体成分。L-羟脯氨酸(HLP)成功诱导后大鼠尿液中草酸的含量显著升高,从而引发肾草酸钙结石形成。(1)一般及生化指标：TFDS对照组和空白组大鼠各参数均无显著性差异(P>0.05)。与空白组比较,成石组大鼠体重变化及摄食量显著降低(P<0.01),肾重量和饮水量则显著增加(分别P<0.01,P<0.05)；尿量显著增加(P<0.01),pH值、尿肌酐、尿蛋白等均显著下降(P<0.01)；尿钙、尿镁显著降低(分别P<0.05,P<0.01),24h尿草酸显著增加(P<0.05),而24h尿柠檬酸则显著减少(P<0.05)；尿CaOx结晶显著增加(P<0.01),尿液中可见大量典型的信封样、六面体CaOx结晶；血肌酐和尿素氮显著增加(分别P<0.01,P<0.05)。与成石组比较,TFDS高剂量组大鼠体重变化显著增加(P<0.05),同时肾重量显著下降(P<0.05)；TFDS低剂量组大鼠饮水量显著下降(P<0.05),但摄食量则显著增加(P<0.05)；TFDS高剂量组大鼠尿液pH值和尿肌酐均显著增加(分别P<0.01,P<0.05)；TFDS低剂量组大鼠尿钙、尿镁显著增加(P<0.05),24h尿柠檬酸亦显著增加(P<0.05)；TFDS高剂量组大鼠24h尿草酸显著降低(P<0.01)；TFDS低、高剂量组大鼠尿CaOx结晶显著减少(P<0.01)；TFDS高剂量组均能降低血肌酐和尿素氮水平(P<0.05),其中,TFDS低剂量组还能降低血尿素氮水平(P<0.05)。(2)肾脏病理分析指标：空白组和TFDS对照组肾组织结构整齐,肾小管腔内未见结石形成。成石组大鼠肾组织可见管腔明显扩大,上皮细胞脱落,间质中大量炎性细胞浸润,从髓质到皮质均可见大量草酸钙结晶沉积。TFDS治疗组肾小管腔内亦可见结晶沉积和管腔扩大,但上述改变较成石组减轻。与空白组比较,成石组大鼠肾CaOx结晶显著增加(P<0.01),TFDS干预后大鼠尿CaOx结晶显著减少,与成石组比较,TFDS低、高剂量组大鼠肾CaOx结晶显著减少(P<0.01)。TFDS对照组和空白组大鼠比较,MDA、SOD、CAT和GSH-Px等均无显著性差异(P>0.05)。与空白组比较,成石组大鼠MDA显著增加(P<0.01),而CAT和GSH-Px则显著降低(分别P<0.01和P<0.05)。与成石组比较,TFDS低剂量组大鼠MDA显著减少(P<0.01),而GSH-Px则显著增加(P<0.01)；TFDS高剂量组大鼠MDA也显著减少(P<0.01),而CAT和GSH-Px均显著增加(分别P<0.05和P<0.01)。MCP-1、OPN和TGF-β三种蛋白在空白组和TFDS对照组均为弱表达,而成石组三种的蛋白表达则显著增强,与成石组相比,使用TFDS进行干预后,TFDS低、高剂量治疗组三种蛋白表达显著减少,其中以高剂量组为明显。结论：大孔吸附树脂是广金钱草总黄酮有效、稳定的分离提纯方法,液质联用技术为TFDS的质量控制提供了有力的保障。HLP喂饲法诱导高草酸尿建立草酸钙结石模型效果确切,值得推广。TFDS具有抑制大鼠草酸钙结石形成的作用：1)它能够降低24h尿草酸排泄,增加尿钙、尿镁及尿柠檬酸排泄,以及提高尿液PH值减轻肾小管酸中毒,保护肾功能。2)TFDS能够抑制HLP造模形成的ROS,减少大鼠过氧化物MDA的生成,降低抗氧化酶的消耗,发挥抗氧化应激损伤的作用,从而缓解肾小管上皮细胞的过氧化损伤。3)TFDS的抗氧化损伤效应也可能与下调肾脏OPN、MCP1和TGF-β等炎症相关介质表达有关。