逆转录病毒载体表达的TGFα反义RNA对人脑胶质瘤细胞BT325的生长抑制和诱导分化作用

来源 :中国人民解放军空军军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chinaoristand
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转化生化因子α(TGFα)是一种小肽分子,正常细胞较少产生,而在许多肿瘤组织(肾癌,黑色素瘤等)却大量合成。TGFα与细胞表面的表皮生长因子受体(EGFR)结合,以自分泌方式参与肿瘤的形成和生长,具有重要的肿瘤诊断、预后及疗效评估意义。胶质瘤是临床常见的肿瘤之一,其死亡率极高。有关胶质瘤中TGFα状况的文献报道较少且互有出入。采用分子生物学方法研究胶质瘤中TGFα及相关基因的改变并予以纠正具有重要的理论和临床意义。 为开展此项工作,我们函索到phTGF-1-10-925质粒,其载体部分为pBR327,在EcoRI位点处插有925bp的TGFα cDNA片段。为鉴定此质粒,先用EcoRI及EcoRIPstl进行酶切图谱分析,此外,我们合成了一对针对TGFα第四外显子的引物,以该质粒为模板进行PCR,并对PCR片段进行DNA序列分析。结果表明所扩增片段确系TGFα第四外显子。 我们以phTGFα-1-10-925和c-myc质粒探针,检测了两株瘤细胞系(BT325,SHG44)及数例临床脑胶质瘤标本中TGFα和c-myc基因的变化。Southern杂交表明TGFα基因无扩增,但两株细胞系及4/6病例有TGFα基因的高表达,正常脑组织无表达。本文还以建立的定量差异PCR技术(靶基因为TGFα第四外显子,参比基因为ras第一外显子)考察了胶瘤中TGFα基因的拷贝数,其结果与Southern杂交相同。c-myc基因检测表明各种胶质瘤中有不同程度的c-myc基因扩增和重排,同时伴有c-myc基因的高表达。TGFα和c-myc的高表达具有平行性。 我们采用化学合成方法合成了TGFαN末端七肽小分子(Val-Val-Ser-His-Phe-Asn-Asp),并以EDC为交联剂将其与BSA偶联后免疫兔子制备出TGFα抗体。该抗体抗同一抗原决定簇,与EGF无交叉反应,且具有抑制BT325细胞生长的活性。
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