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目的 探讨p38 MAPK对百草枯中毒肺组织中的caspase3作用,以此研究急性百草枯中毒的机制。方法 健康雄性SD大鼠,体重200-220g。按随机数字表法随机分成三组:A组为对照组、B组为染毒组、C组为PQ+p38阻滞剂组。A组大鼠接受生理盐水100mg/kg灌胃,B组、C组小鼠接受100 mg/kg百草枯一次性灌胃,C组行10 mg/kg/天SB203580腹腔注射。分别于实验开始后的第1、3、5天各取6只大鼠,10%水合氯醛以0.03ml/kg进行腹腔注射麻醉,打开腹腔,腹主动脉放血处死,剖开颈部皮肤暴露气管,同时开胸暴露心肺及大血管。取以下样本:①小鼠呈仰卧位固定于小鼠固定板上,可通过丝线结扎左主支气管,2.5ml注射器吸取PBS缓冲液2ml后,与头皮针留置管连接,缓慢轻柔将液体注入气管内,并同时注意观察小鼠气管近段连接处是否有液体溢出。当全部PBS缓冲液体均注入小鼠肺内后,渐渐改小鼠固定板上倾斜角度,让其呈多角度倾斜,使PBS缓冲液均匀分布于小鼠肺内。3min后,恢复小鼠为头低足高位,用注射器将PBS液缓慢回抽,所得液体即为支气管肺泡灌洗液,将其注入试管内保存。此后,重复上述过程2次,所得的所有BALF离心(2000rpm×15min),留取上清,并分装入1.5ml EP管内置于-80℃冰箱中保存备用。②将小鼠腹腔麻醉后固定于小鼠固定板上,剪开大鼠胸腔,暴露心肺及大血管,用10mL注射器穿刺右心室,结扎上下腔静脉以及主动脉,同时结扎左侧肺门,剪开左心房,用0.9%氯化钠溶液持续冲洗肺血管中的残留血液,直至从左心房处流出的液体为无色透明为止。后快速取右上肺用RNA保存液置于-20℃摄氏度冰箱保存备用,待做荧光实时定量PCR检测TNF-α、p38MAPK。③左肺叶放置于10%中性甲醛中固定24h以上(固定液与组织体积比保证在9:1以上),后续病理和tunnel染色凋亡检测,检查肺损伤情况。④右肺下叶在培养皿中冲洗表面血液,于-80℃保存,后行WB检测cleaved-caspase 3和NF-κB p65。余下肺保存备用;。结果 1)PQ组在第1、3、5天大鼠肺泡灌洗液中TNF-α蛋白表达水平与NS组相比有明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);PQ+SB组第1天大鼠肺泡灌洗液中TNF-α蛋白表达水平与PQ组相比差异无统计学意义(P>0.05),而在第3、5天则明显低于PQ组,差异有统计学意义(P<0.05)。2)PQ组在第1、3、5天大鼠肺组织中TNF-α和p38 MAPK mRNA表达水平与NS组相比有明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);PQ+SB组第3、5天肺组织中TNF-α和p38 MAPK mRNA表达水平与PQ组相比明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。PQ+SB组第1天大鼠肺组织中TNF-α和p38 MAPK mRNA表达水平与PQ组相比差异无统计学意义(P>0.05)。3)PQ组在第1、3、5天大鼠肺组织中cleaved-caspase 3和NF-κB p65蛋白表达水平与NS组相比均有明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);PQ+SB组第3、5天大鼠肺组织中cleaved-caspase 3和NF-κB p65蛋白表达水平与PQ组相比明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),而在第1天中PQ+SB组的cleaved-caspase 3蛋白表达水平与PQ组相比差异无统计学意义(P>0.05),第1天中PQ+SB组的NF-κB p65蛋白表达水平与PQ组相比明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。4)肺组织病理学变化显示同一时间点PQ组较NS组中毒后的病理损伤明显,而同一时间点PQ+SB组较PQ组病理损伤明显减轻。5)肺组织tunnel染色镜下可见NS组的大鼠肺组织切片有较多含蓝色细胞核的阴性细胞,含蓝黑色细胞核的阳性比例较少。而PQ组则可见比例明显增加的阳性细胞。在第3天与第5天PQ+SB组中,大鼠肺组织中的凋亡阳性细胞比例较PQ组明显减少,而阴性细胞比例较高。结论 1)p38 MAPK抑制剂SB203580能减少百草枯中毒大鼠肺组织中TNF-α和NF-κB的表达,减轻百草枯中毒导致的急性肺损伤反应。2)p38 MAPK抑制剂SB203580能够减少百草枯中毒大鼠肺组织中cleaved-caspase3的表达。3)p38 MAPK可能参与了百草枯中毒大鼠肺组织中细胞的凋亡反应过程。