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喉气管狭窄的常见原因为喉气管外伤、高位气管切开、气管插管等造成瘢痕过度增生,瘢痕挛缩。目前治疗的主要方法是内镜激光手术切除瘢痕后再置入支架维持一定的气管通道,但存在一定的复发率,治疗效果不理想。而药物治疗操作简单、能避免二次创伤,患者更容易接受,其中丝裂霉素C由于价格便宜,副作用小,一直是治疗喉气管狭窄研究最多的药物。关于瘢痕狭窄的基础研究,研究学者普遍认为瘢痕的形成与一系列细胞生长因子水平的改变有密切关系,其中与转化生长因子β1 (TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)关系最为密切。但在瘢痕形成的过程中,生长因子之间有复杂的交叉,丝裂霉素C作用的机制仍待进一步研究。本课题通过构建一种简单、稳定的兔喉气管狭窄模型,将丝裂霉素C作为单一变异因素,主要研究丝裂霉素C治疗喉气管狭窄的有效性和可行性。并初步探讨丝裂霉素C抑制成纤维细胞增生的相关作用机制。第一部分兔喉气管狭窄模型的构建和丝裂霉素C用药效果监测目的检测兔喉气管狭窄模型的稳定性,探讨丝裂霉素C在治疗兔喉气管狭窄中的作用。方法将30只家兔按照简单随机化分组分为对照组、模型组、0.5mg/ml低浓度用药组、2mg/ml中浓度用药组、5mg/ml高浓度用药组。用喉气管刮擦的方法制备喉气管狭窄模型,用药组的用药方式为棉球覆盖伤口表面。从模型组中随机选取一只家兔于术后第9、18天在纤维喉镜下观察,术后20天取各组兔喉气管狭窄组织做测量,分析比较各组喉气管狭窄度。结果模型组和用药组与对照组相比均出现明显喉气管狭窄(p<0.05),中、高浓度用药组喉气管狭窄度明显低于模型组(p<0.05),低浓度用药组与模型组无明显差异(p>0.05),中、高浓度用药组之间相比较,差异无统计学意义(P>0.05)；3个用药组各自组内对比无统计学意义(P>0.05)。结论本实验采用的兔喉气管狭窄的建模方法稳定有效,且操作简便,适用于各种喉气管狭窄的实验研究。丝裂霉素C对预防和早期治疗瘢痕性喉气管狭窄具有重要作用。第二部分 丝裂霉素C治疗兔喉气管狭窄机制研究目的探讨丝裂霉素C在兔成纤维细胞中的作用机制方法取第一部分中模型组家兔喉气管狭窄组织做兔成纤维细胞培养,分别置于0、2.5、12.5、50、100、200mg/L的丝裂霉素C中培养后用流式细胞仪检测细胞凋亡差异,通过Western blot、灭光定量PCR检测细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)在蛋白和mRNA转录水平表达变化。结果随着丝裂霉素C浓度的增加,成纤维细胞早期、晚期凋亡率明显上升,TGF-β1、bFGF的蛋白和mRNA表达量明显下降。结论丝裂霉素C可明显诱导兔成纤维细胞凋亡,下调TGF-β1、 bFGF的蛋白和mRNA表达量,对预防和治疗瘢痕性喉气管狭窄具有重要作用。