ABCG2基因调节对肝癌细胞生物学行为的影响

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目的:1通过ABCG2重组质粒转染ABCG2阴性表达的SMMC7721细胞,以观察过表达ABCG2后对SMMC7721细胞的耐药、增殖及侵袭能力的影响2通过靶向ABCG2基因的SiRNA转染ABCG2阳性表达的SMMC7721细胞,以观察靶向干扰ABCG2后对SMMC7721细胞的耐药、增殖及侵袭能力的影响;方法:1利用脂质体LipofectamineTM2000分别将PCDNA3.1(+)-ABCG2重组质粒和PCDNA3.1(+)空载体转入ABCG2阴性表达的SMMC7721细胞,半定量RT-PCR和Western-blotting检测ABCG2基因在转染细胞SMMC7721的表达,MTT法检测转染细胞阿霉素耐药性和增值能力的改变,Transwell、室检测转染细胞侵袭能力的变化;2利用脂质体LipofectamineTM2000分别将(?)ABCG2-SiRNAft和noscnse-siRNA转染ABCG2阳性表达的SMMC7721细胞,半定量RT-PCR和Western-blotting检测ABCG2基因在转染细胞SMMC7721的表达,MTT法检测转染细胞阿霉素耐药性和增值能力的改变,Transwell、室检测转染细胞侵袭能力的变化。结果:1脂质体法转染ABCG2阴性SMMC7721细胞后,重组质粒组SMMC7721细胞的ABCG2基因mRNA和蛋白水平表达与对照组相比均明显升高(P<0.05),过表达ABCG2后重组质粒组细胞与对照组细胞相比较,阿霉素耐药、增殖及侵袭能力均明显增强(P<0.05),而空载体对照组和Blank空白对照组相比较,SMMC7721细胞的ABCG2基因mRNA和蛋白水平表达无明显差异(P>0.05),对阿霉素耐药、增殖及侵袭能力比较均无明显差异(P>0.05)。2脂质体法转染ABCG2阳性SMMC7721细胞后,Si-ABCG2组SMMC7721细胞的ABCG2基因mRNA和蛋白水平表达与对照组相比均明显下调(P<0.05),靶向干扰ABCG2后Si-ABCG2组细胞与对照组细胞相比较,阿霉素耐药、增殖及侵袭能力均明显减弱(P<0.05),而nonsiRNA对照组和Blank空白对照组相比较,SMMC7721细胞的ABCG2基因mRNA和蛋白水平表达无明显差异(P>0.05),对阿霉素耐药、增殖及侵袭能力比较均无明显差异。(P>0.05)结论:肝癌细胞的化疗耐药、增殖及侵袭能力可能与ABCG2的表达有关,结合我们前期动物实验结果:ABCG2阳性细胞的成瘤性明显高于ABCG2阴性细胞,提示ABCG2阳性肝癌细胞更加具有肿瘤干细胞特性。因此,ABCG2可能是肝癌干细胞的标志之一。
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