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变态反应性疾病(过敏性疾病)被世界卫生组织(WHO)列为21世纪重点防治的三大疾病之一，是当前世界性的重大卫生学问题，世界各国变态反应性疾病的总发病率高达10％～30％，此类疾病包括过敏性哮喘(外源性哮喘)、过敏性鼻炎等，是临床上的常见病、多发病。
尘螨是引发变态反应疾病的最重要的常见过敏原之一。在已知的数十种尘螨中，与人类过敏性疾病关系最密切的主要有屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus,Derp)和粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae,Derf)。螨变应原来源于其身体(包括2类变应原等)和粪便(1类变应原为主)，其中1、2类螨变应原是最主要的。自20世纪60～70年代以来，世界各国学者们对尘螨变应原进行了大量的研究工作。利用基因重组技术在体外表达具有抗原性的粉尘螨重组变应原，是变态反应性疾病诊断与脱敏疫苗研究中的重要途径。目前国外应用重组的方法制备变应原已有较多的报道，但国内仅见少量报道。目前国内临床(变态反应科或呼吸内科)大多使用院内粗浸液变应原对变态反应性疾病患者进行诊断和脱敏治疗，而运用分子生物学技术对粉尘螨变应原从分子水平开展研究仍处于起步阶段。
本研究以粉尘螨的两个主要变应原Derf1和Derf2基因为研究对象，通过RT-PCR方法分别扩增目的基因片段，克隆入T-载体，经测序表明它们与NCBI上公布的序列的同源性分别为100％及98％；经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后，目的基因分别亚克隆入表达载体pET24a(+)中，然后转化高效表达菌BL21Star，用IPTG进行诱导表达。获得了分子量分别35kD和14kD的目的蛋白，目的蛋白主要以不溶的包涵体形式存在；采用Ni2+亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化，并进行了免疫学特性鉴定。以粉尘螨过敏性患者的阳性混合血清为一抗，生物素标记的鼠抗人IgE为二抗，进行Western-blot印迹检测，结果显示两种变应原都具有较好的IgE结合活性。本研究克隆表达了粉尘螨的主要变应原Derf1和Derf2，为进一步开展变应原蛋白和重组疫苗的研究奠定了基础。
Ⅰ在研究过程中发现，粉尘螨重组蛋白在大肠杆菌中的高水平表达是以不溶的、无活性的包涵体形式存在，经洗涤分离、变性溶解后，必须再经过一个适合的复性过程实现变性蛋白的重折叠，才能够获得天然结构，完成生物学功能。对重组变应原蛋白复性过程中的蛋白构象进行分析，可检测变应原的复性程度，了解变应原蛋白结构与其免疫学活性之间的作用。本研究以Derf1重组蛋白为研究对象，通过荧光光谱来研究Derf1蛋白复性前后以及在加入变性剂和不同的酸碱度等不同微环境中的光谱学特征及其变化规律，初步建立起一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱学实验方法。